论文部分内容阅读
目的:从不同组织类型卵巢癌组织中提取癌相关纤维母细胞(CAFs),探讨CAFs在卵巢癌恶性行为中的可能作用。方法:1.从不同病理组织类型的卵巢癌组织中提取、分离、培养CAFs与癌细胞,用免疫细胞化学法对CAFs予以鉴定,并与正常纤维母细胞(NFs)相区分;2.利用免疫组织化学法检测卵巢癌原发病灶与转移病灶之间CAFs密度差异,并用酶联免疫反应吸附法测定各肿瘤病灶中分离的相同数目CAFs所分泌的SDF-1含量;3.采用matrigeltranswell侵袭实验比较从不同卵巢癌组织中提取的CAFs与癌细胞的侵袭能力;4.将CAFs分别与三种上皮性卵巢癌细胞株(SKOV3/OVCAR-3/HEY)行体外间接共同培养,通过transwell迁移实验检测不同卵巢癌组织中提取的CAFs对三种细胞株迁移能力的影响;5.利用单细胞凝胶电泳实验比较从相同组织中提取的CAFs与癌细胞经顺铂处理后的凋亡程度,检测其对顺铂治疗的反应性;并用免疫荧光法检测顺铂处理前后CAFs中α-SMA的表达情况。结果:1.免疫细胞化学结果显示从卵巢癌组织中提取的CAFs呈α-SMA高表达,而正常卵巢组织中提取的正常纤维母细胞几乎不表达α-SMA;2.免疫组化染色提示卵巢癌肠道转移灶中CAFs密度明显高于原发病灶、网膜转移灶,但原发癌灶与各转移灶中相同数目的CAFs所分泌的SDF-1量无统计学差异;3.卵巢癌组织中提取的CAFs,其侵袭力明显强于同体组织中提取的癌细胞(P<0.01);4.将CAFs分别与三种细胞株体外间接共同培养,发现SKOV3、HEY两者细胞株的迁移力明显增加(P<0.01),而OVCAR-3细胞迁移力增加无明显统计学意义(P=0.05);5.单细胞凝胶电泳显示,用顺铂处理同体提取的CAFs与癌细胞后,癌细胞的凋亡比例明显强于CAFs(P<0.01),说明CAFs对顺铂化疗不敏感;并且经顺铂处理后,CAFs的α-SMA表达增强(P<0.01)。结论:卵巢癌原发病灶与转移病灶中CAFs的密度存在差异,提示CAFs的表达可能参与了卵巢癌远处器官特异性转移,这种转移特异性可能与相应部位CAFs的数目有关;CAFs能促进上皮性卵巢癌细胞株的迁移运动,且表现出比癌细胞更强的恶性浸润能力;与癌细胞相比较,CAFs对顺铂化疗不敏感,且经顺铂处理后其α-SMA表达反而升高,这一结果提示CAFs可能参与了卵巢癌耐药或化疗后复发,但机制有待进一步探讨。