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第一部分脓毒症相关急性肺损伤患者炎性因子、Th1/Th2细胞差异与疾病严重程度关系研究目的:观察不同程度脓毒症相关急性肺损伤患者炎性因子、Th1/Th2细胞差异与疾病严重程度之间的关系。方法:1.分析我院2010年1月至2021年4月就诊的脓毒症患者388例,将伴发急性肺损伤患者纳入急性肺损伤组(n=68),其余患者纳入无肺损伤组(n=320),采集两组患者入院时白细胞(White blood cell,WBC)、中性粒细胞(Neutrophile granulocyte,N)、降钙素原(Procalcitonin,PCT)、C反应蛋白(C reactive protein,CRP)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白介素6(Interleukin 6,IL-6)、白介素8(Interleukin 8,IL-8)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值水平,确定两组患者各种炎性因子、血清学指标、Th1、Th2细胞及Th1/Th2差异。2.将脓毒症合并急性肺损伤者分为轻度组、中度组、重度组,分组依据患者的Murray肺损伤评分量表评分进行界定。利用pearson相关系数计算脓毒症急性肺损伤患者炎性因子、Th1/Th2细胞因子差异与疾病严重程度的相关性。并利用ROC曲线确定各个指标对急性肺损伤、疾病严重程度的诊断效能。结果:1.急性肺损伤组与无肺损伤组,不同严重程度急性肺损伤组组间性别、年龄、原发病之间对比结果显示差异无统计学意义(P>0.05)。2.急性肺损伤组的N水平较无肺损伤组升高,差异有统计学意义(P<0.05);不同严重程度的急性肺损伤患者间对比WBC、N差异存在统计学意义(P<0.05);急性肺损伤组与无肺损伤组,不同严重程度急性肺损伤组间对比,PCT、CRP、hs-CRP差异均存在统计学意义(P<0.05)。3.急性肺损伤组与无肺损伤组相比,IL-6、IL-8、TNF-α、Th1细胞、Th1/Th2比值水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);不同严重程度的急性肺损伤组间对比IL-6、IL-8、TNF-α、Th1细胞、Th2细胞、Th1/Th2比值差异均有统计学意义(P<0.05)。4.用于急性肺损伤的诊断,灵敏度方面,hs-CRP>IL-6>IL-8>CRP>TNF-α>Th1细胞>N>PCT>Th1/Th2比值,特异性方面,IL-8>hs-CRP>PCT>Th1/Th2比值>IL-6>Th2细胞>CRP>Th1细胞>N>TNF-α。用于中度、重度急性肺损伤的诊断,灵敏度方面,各指标均在95%以上;特异性方面,IL-8>hs-CRP>Th2细胞>IL-6>PCT>CRP>Th1细胞>Th1/Th2比值。用于重度急性肺损伤的诊断,灵敏度方面,除CRP外均>95%;特异性方面,IL-8>hs-CRP>IL-6>PCT>CRP>Th1/Th2比值>Th1细胞>N>Th2细胞>TNF-α。结论:1.脓毒症伴急性肺损伤患者会因N、PCT、CRP、hs-CRP、IL-6、IL-8、TNF-α、Th1细胞、Th1/Th2比值升高而使急性肺损伤的发生风险升高;急性肺损伤严重程度会随着N、PCT、CRP、hs-CRP、IL-6、IL-8、TNF-α、Th1细胞、Th1/Th2比值升高而加重。2.轻度急性肺损伤、中度急性肺损伤、重度急性肺损伤患者均可利用多种炎性因子,尤其是可以利用hs-CRP的相关标准为疾病严重程度的评估提供帮助,对于中重度急性肺损伤、重度急性肺损伤患者可以进一步利用IL-6、IL-8作为鉴别指标,Th2细胞可对中度急性肺损伤患者形成筛查价值;PCT及Th1/Th2比值使重度急性肺损伤患者的筛查价值提升。第二部分高浓度氢气对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究目的:观察66.7%的高浓度氢气吸入对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠急性肺损伤病理反应和血管通透性的影响,并探讨sirt1/NF-κB/catalase信号通路在此过程中的作用。方法:将动物或细胞分为对照组,LPS组,LPS+66.7%氢气吸入组和LPS+白藜芦醇组,(1)电解水产生66.7%氢气,利用HE病理染色检测66.7%氢气吸入和阳性对照药白藜芦醇对LPS所致急性肺损伤病理反应的影响,并进行肺损伤评分;(2)利用肺组织的湿/干重比检测各组肺水肿程度;(3)利用ELISA和PCR检测各组肺泡灌洗液中IL-1β,TNF-α、IL-8、ICAM-1、VCAM-1以及sirt1的水平,利用MDA含量试剂盒检测各组肺组织中MDA水平;(4)利用伊文思蓝染料检测各组肺血管的渗漏,利用单层细胞跨膜电阻测定各组细胞通透性;(5)利用免疫组织化学和western blot检测66.7%氢气吸入对sirt1,NF-κB和catalase表达的影响;(6)利用免疫荧光检测66.7%氢气吸入对细胞NF-κB核转位的影响。结果:1.高浓度氢气吸入可减轻LPS诱导小鼠急性肺损伤炎症反应,改善肺水肿;可降低肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β,TNF-α、IL-8水平,降低粘附蛋白ICAM-1和VCAM-1的表达水平,同时降低肺部氧化应激反应;可改善LPS诱导的肺血管通透性升高,降低肺微血管内皮细胞通透性。2.肺部高表达sirt1可显著降低LPS诱导的肺部炎症因子释放;3.LPS急性肺损伤组sirt1表达显著降低,而高浓度氢气吸入可以显著增加sirt1表达水平,同时降低肺组织中NF-κB表达,减少NF-κB在细胞核的定位。此外,高浓度氢气吸入可以显著增加肺部抗氧化蛋白catalase的表达。结论:1.电解水产生的66.7%高浓度氢气对LPS诱导的急性肺损伤肺部病理反应有显著保护效应;2.66.7%高浓度氢气暴露可以改善肺血管通透性,减轻肺水肿;3.66.7%高浓度氢气改善急性肺损伤与其增加sirt1表达,从而降低炎症和氧化应激反应相关。