微小转移（micrometastases）是指用常规的检查方法很难发现的非血液系统的恶性肿瘤细胞的转移，包括直径小于2mm的微小转移灶及肿瘤原发灶以外的组织、器官或者循环中的单个细胞或者细胞团。大多数学者都认同以直径<2mm为临界作为微转移的判断标准[1]。研究显示，乳腺癌是一种全身性疾病，早期可能就存在血液、淋巴及骨髓的微转移，而这些微转移可能是日后患者复发、转移的潜伏病灶。那么，如何检测出这些处于亚临床的微转移就成了目前迫切需要解决的问题。微转移的检测，关键是要寻找特异的肿瘤标志物，目前用于乳腺癌微转移检测的相关生物学标志物主要有：细胞角蛋白（CK）、癌胚抗原（CEA）、肿瘤抗原（CA12-5）等，这些指标虽然对乳腺癌病情复发的监测有一定的意义，但由于组织特异性较低，检测的结果通常不理想。如果能找到一种特异性强、敏感性高的标志物来检测亚临床的微转移，那么对于乳腺癌病人的预后判断、指导治疗、生存率的提高有重要临床意义。乳腺珠蛋白[2]（hMAM）是近年来发现的一个与乳腺上皮生长相关的组织特异性蛋白，相对分子质量10.5kd。研究证实hMAM只在乳腺正常组织中有表达，在乳腺癌中高表达，在其它癌组织中检测不到，但hMAM在正常组织中的功能和在乳腺癌发病机制中所起的作用还不太清楚。鉴于其高的特异性，受到广泛的关注，越来越多的被用于乳腺癌淋巴结、骨髓及外周血中微小转移的检测，是一个很有临床应用前景的标志物。目前检测乳腺癌微转移的方法主要有免疫组化法、流式细胞法等，但是这些方法的假阳性率较高、敏感性较低。近年在定性PCR基础上发展的实时荧光定量PCR（Real-time Polymerase Chain Reation；RQ-PCR)技术以其敏感、快速、特异等优点而广受欢迎。由于RQ-PCR使用了特异的TaqMan荧光探针，使PCR产物能更加准确性的定量，而且敏感性更高，可以达到（10-6-10-7）。目的：建立荧光定量PCR方法检测乳腺癌组织、腋窝淋巴结及外周血中hMAM mRNA的表达情况，探讨hMAM mRNA的表达与乳腺癌淋巴结、外周血中微转移及预后的关系，为临床探索新的、有价值的指标。方法：1.常规方法提取各组织及外周血标本中的mRNA，逆转录为cDNA备用。查阅Genbank基因库寻找hMAM基因序列，Beacon Desigener 7.0软件设计引物及探针，应用BlastResearch软件检测其特异性。先进行乳腺癌组织hMAM以及管家基因GADPH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）的定性PCR，将阳性标本扩增产物提取质粒后测其浓度，并检测出拷贝数，倍比稀释为不同浓度，进行荧光定量PCR，根据其结果作出标准曲线。2．对要检测的标本进行实时荧光定量PCR扩增，利用管家基因作为外参照，根据标准曲线检测出各标本中hMAM mRNA的表达量。结果：1.乳腺癌组织中hMAM mRNA的表达情况：应用RQ-PCR方法检测了15例新鲜癌组织中hMAM mRNA的表达，其中14例为阳性，阳性率93%，在良性乳腺肿瘤及结肠、直肠及卵巢癌中均未能检测出hMAM mRNA的表达。2.在腋窝淋巴结中的表达情况：应用RQ-PCR方法共检测了30例乳腺癌患者腋窝淋巴结中hMAM mRNA的表达。18例病理证实阳性的淋巴结中有17例hMAM mRNA的表达阳性，hMAM mRNA阳性率为94.4%。12例病理证实阴性的淋巴结，3例hMAM mRNA表达阳性，阳性率25%。3. hMAM mRNA在外周血中的表达情况：检测54例乳腺癌患者外周血循环细胞中hMAM mRNA表达，其中16例hMAM mRNA阳性，阳性表达率29%。良性乳腺肿瘤及正常人外周血中hMAM mRNA表达均为阴性。且证实和乳癌临床分期有关系（P<0.05），和腋窝淋巴结状态及受体状况无关。本研究通过应用RQ-PCR技术检测乳腺癌组织、腋窝淋巴结、外周血中hMAM mRNA的表达情况，证实了乳腺珠蛋白只在乳腺癌组织中表达，在乳腺良性肿瘤及其它癌组织中未见表达，是一特异性较高的乳腺癌标志物。它的表达可以反映早期乳腺癌在淋巴结及外周血中微转移的情况，对患者的预后判断、指导治疗有很重要的临床意义。结论：鉴于乳腺珠蛋白高的特异性，可以作为检测乳腺癌微转移的标志物。近年发展的荧光定量PCR技术，为检测微转移提供了更加准确、敏感、便捷的方法。很多研究证实，乳腺癌微小转移与患者的预后密切相关，它将有可能成为一个独立的预后指标。