携氧剂对有效霉素A生物合成的影响及其机制探索

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有效霉素A是一种重要的农用抗生素,作为由好氧菌分泌的次级代谢产物,培养基中溶解氧浓度对其发酵产量的影响尤为显著。携氧剂作为一类具有高溶解氧能力的化合物,可以显著提升环境中氧气传递速率,其作用已在很多发酵实验中得以验证。有效霉素A的价值在农业领域已经得到了充分体现,对其产量需求逐年升高,因此如何有效提高其发酵产量便成为了研究的热点。有报道证明提高发酵环境中氧化压力可以促进有效霉素A的生物合成,但目前却没有有效的方法可以应用于实际生产,而且对携氧剂影响发酵过程的机理探索也不够深入。本研究以吸水链霉菌5008为发酵菌种,通过添加携氧剂引入了一种新型的发酵策略,经过对携氧剂种类与添加量的筛选,发现加入0.01%(v/v)液体石蜡对有效霉素A产量的促进效果最为明显;对发酵参数的测定发现液体石蜡会在对数期加快菌体生长速率与糖利用率,推测液体石蜡提高效霉素A产量的作用是通过激活菌内代谢调节实现。结合到携氧剂的特性,我们对胞内氧化压力水平进行了检测,发现由液体石蜡诱导产生的活性氧物质是激活这一调节作用的重要因素。在感受氧化环境变化方面,氧化态感受全局调控子以及有效霉素A的合成基因均作出响应的上调表达,此外主要碳代谢途径在次级代谢阶段,也明显的由糖酵解途径转向了有利于有效霉素A前体积累的磷酸戊糖途径。这些结果在基因水平和酶活水平上全面解释了有效霉素A产量提高的原因。在发酵过程中我们发现,有效霉素A伴生色素的吸光值与有效霉素A的产量之间存在稳定且密切关系。通过对两者关系进行拟合,我们建立了一种准确且稳定的有效霉素A快速检测法。此外我们又对另一种对有效霉素A产量有潜在影响的生物小分子-氨基酸对发酵作用进行了验证,证实发酵过程中氮源种类的不同也会影响有效霉素A的生物合成。最后,在5L发酵罐模拟了液体石蜡添加发酵在生产环境中的影响效果,证实添加液体石蜡是一种促进有效霉素A产量的有效的发酵策略。
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