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全文分为二部分：
第一部分：大鼠肝星状细胞的分离培养鉴定。
[目的]：为研究肝纤维化的分子机制，提供充足的肝星状细胞(hepatic stellate cells.HSCs)。
[方法]：禁食12小时的成年雄性Sprague-Darwley大鼠，先后用D-Hank’s和含有Ⅳ型胶原酶的D-Hank’S灌流，再用含有Ⅳ型胶原酶和DNA酶的溶液37℃中孵育灌流后肝脏25-30分钟分离人鼠HSCs，18％的Nycodenz梯度密度离心法纯化HSCs。DMEM培养基、10％胎牛血清、5％CO<,2>、饱和湿度以及37％条件下培养。显微镜下观察细胞形态，免疫荧光法测细胞内Desmin和α-SMA表达。
[结果]：肝星状细胞得率约为1xl0<7>/鼠肝，纯度>80％，存活率为90％。
[结论]：原位灌流法是一种可靠、有效的大鼠肝星状细胞分离方法。
第二部分：缺氧诱导因子-1α对肝星状细胞中MMP-2基因表达的调控作用。
[目的]：①了解HSCs在缺氧情况下基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2，MMP-2)基因的激活是否与缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)有关。②了解肝细胞(hepatocytes，HC)在缺氧条件下是否对HSCs表达MMP-2以及对酶活性有影响。
[方法]：①合成MMP-2基因上含有缺氧应答元件(hypoxia response element，HRE)的一段寡核苷酸序列(23bp)，克隆入pGL-3promoter，构建重组载体pGL-3mmp2。②通过脂质体转染pGL-3mmp2到大鼠肝星状细胞(HSC-T6)，细胞培养24-48小时后，用化学缺氧法(培养基中加COCl<,2>)模拟缺氧状态6小时，然后测定荧光素酶活性(Luc)。③运用网站生物软件分析HIF-1αmRNA全长，按照评分挑选两条得分最高的干涉序列，连接到RNA干涉(RNAinterference)专用载体，经测序鉴定后转染到HSCs中，培养48小时后用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA变化，以确定干涉效果。@HSCs和HC双层共培养，其比例约为10:1。无血清缺氧培养后，取上清采用明胶酶谱法检测上清MMP-2活性以及RT-PCR法检测HSCsMMP-2核酸(mRNA)水平表达变化。
[结果]：①经测序鉴定，所克隆的基因片段与预期完全一致，序列无碱基突变。②转染pGL-3mmp2的HSCs荧光素酶活性平均值明显高于空载质粒组，是其11.7倍。③成功构建两种大鼠HIF-1α RNA干涉质粒，其干涉效果在mRNA水平得到初步验证。@HSCs与HC共培养后MMP-2活性随CoCl<,2>浓度升高而增强，MMP-2 mRNA水平逐渐升高。
[结论]：①HIF-1α参与MMP-2基因表达调控。②缺氧情况下，HIF-1α在HSCs中起增强MMP-2转录活性的作用。③缺氧时，HC对HSCs表达MMP-2以及对酶活性均有调节作用。