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目的:构建GDNF真核表达载体,制备壳聚糖纳米粒子,研究壳聚糖纳米粒子载GDNF基因在脊髓继发性损伤中的作用,为治疗脊髓损伤寻找新的途径。方法:首先应用RT-PCR、基因测序、分子克隆获得pcDNA3.1/GDNF质粒。同时制备壳聚糖纳米粒子,并对壳聚糖纳米粒子作为基因载体的相关性能进行检测。在体外实验中,壳聚糖纳米粒子载质粒GDNF基因从细胞外转入胶质细胞内,并在细胞内表达GDNF蛋白,进行细胞免疫化学,细胞增殖试验,流式细胞仪以及Westernblot检测;在体内实验中,首先制作脊髓损伤模型,将壳聚糖纳米粒子GDNF基因复合体(CS-nano/pcDNA3.1/GDNF)转入损伤的脊髓,应用免疫组化、实时RT-PCR半定量技术检测GDNF的表达,并进行细胞凋亡检测(TUNEL法)。结果:(1)成功构建大鼠GDNF真核表达载体;(2)制备壳聚糖纳米粒子,壳聚糖性能稳定,对GDNF有很好的保护作用;(3)体外实验中,壳聚糖纳米粒子载质粒GDNF基因能高效表达GDNF,促进细胞增殖,减少细胞凋亡;体内实验中,壳聚糖纳米粒子载质粒GDNF基因能够促进脊髓损伤局部高效表达GDNF,减少细胞凋亡。结论:1、壳聚糖作为基因细胞穿梭载体,对质粒GDNF基因有很好的保护作用,并能将GDNF基因转入细胞内,高效表达GDNF,是一种有效的基因载体细胞穿梭系统。2、GDNF在神经细胞高效表达后能对受损的脊髓组织起到很好的保护作用,促进细胞增殖,减少细胞凋亡,是一种功能很强的神经营养因子。