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脑肠肽(ghrelin)是一种新发现的胃肠道激素，通过作用于其受体GHSR-1a，在哺乳类和鱼类中均起到促进生长、促进摄食以及调节脂肪代谢等生物学功能。本文在斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)中，克隆了ghrelin和两种形式GHSR全长cDNA序列，以及它们的基因序列，并通过Northern blot和RT-PCR分析了ghrelin和两种形式GHSR mRNA在各组织和胚胎发育各阶段的表达情况，还利用原位杂交定位了脑区的GHSR mRNA表达细胞。
首先，本文利用RT-PCR和RACE方法，在下丘脑中克隆了两种形式的斜带石斑鱼GHSR全长cDNA序列，命名为gpGHSR-1a，和gpGHSR-1b。其中gpGHSR-1a编码一个383氨基酸的七次跨膜蛋白而gpGHSR-1b编码一个303氨基酸的五次跨膜蛋白。还克隆了斜带石斑鱼GHSR基因序列，由两个外显子和一个内含子组成，gpGHSR-1a由两个外显子所编码，gpGHSR-1b由第一个外显子和部分内含子序列编码，引起提前终止。相似度分析表明，GHSR-1a跨膜区Ⅱ和跨膜区Ⅲ之间的膜外区，在各物种中高度保守，推测该区域可能是与配体必须的。此外还构建了gpGHSR-1a和-1b的原核表达载体。
进一步利用RT-PCR和RACE方法，在胃中克隆了斜带石斑鱼前脑肠肽原(preproghrelin)全长cDNA序列。preproghrelin cDNA编码一个102氨基酸的前体蛋白，包括26氨基酸的信号肽，20氨基酸的成熟肽和56氨基酸的C末端多肽，除了成熟肽功能位点上的6个氨基酸(GxSFLSP)外，鱼类各物种preproghrelin的氨基酸序列显示高度差异。斜带石斑鱼ghrelin基因包含四个外显子和三个内含子，其中第一个外显子和二个外显子编码了ghrelin成熟肽，与罗非鱼以及黑鲷中研究相类似，而其他鱼类和哺乳类则在5’非编码区多出一个外显子。根据GHSR-1a和ghrelin构建的进化树，均表明斜带石斑鱼在进化地位上与罗非鱼及黑鲷位于同一支，而哺乳类则位于另一端。本文利用Northern blot和半定量RT-PCR检测了ghrelin和两种形式GHSRmlRNA的表达情况。Northern blot和RT-PCR检测发现，ghrelin mRNA只在胃中有表达，并且只有一个转录本。半定量RT-PCR的分析表明，gpGHSR-1a mRNA主要在各脑区中表达，以下丘脑和垂体最高；而gpGHSR-1b mRNA则广泛分布于脑区和各外周组织中。两种GHSR转录本与ghrelin mRNA的组织分布情况显示，gpGHSR-1a可能介导着ghrelin促生长和促摄食方面的生物学功能，而gpGHSR-1b则与ghrelin的作用无关。ghrelin mRNA在下丘脑中没有表达的情况，只在另外两种鲈型目鱼类罗非鱼和黑鲷中报道，可能与它们缺少一个外显子的特殊基因结构有关。在胚胎发育阶段，gpGHSR-1a mRNA从神经胚期开始表达，并在出膜3天后逐步升高，gpGHSR-1b mRNA则从囊泡期开始一直以稳定水平表达，而ghrelin在出膜后3天开始表达。胚胎发育阶段mRNA的表达情况同样表明ghrelin与gpGHSR-1a有功能上的相关。
另外，利用原位杂交方法对斜带石斑鱼脑部的gpGHSR mRNA表达细胞进行了定位。与RT-PCR结果一致，原位杂交同样证明gpGHSR mRNA表达细胞在脑部各区中均存在，而且以下丘脑和垂体中信号最强。