目的:脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是一种脊髓因遭受撞击或打击而发生损伤的中枢神经系统疾病,其致残率极高、病程长、预后差。脊髓损伤治疗已为全世界医药领域所共同面对的重要研究课题。脊髓损伤修复研究面临的主要障碍包括:1.神经元再生困难;2.病灶部位免疫调控复杂3.胶质瘢痕阻碍神经元轴突重连接等。以外源性干细胞移植为主的细胞疗法虽取得了一定成绩,但单一的细胞治疗策略难以应对复杂的抑制性免疫微环境。因此,本课题拟通过小胶质细胞脂筏色谱高通量快速筛选的特点,筛选免疫活性糖类,将免疫调节活性物质与干细胞联用,结合水凝胶于三维体系,构建复合水凝胶支架用于脊髓损伤修复,有机整合组织工程三要素,以实现“三位一体”的治疗脊髓损伤,为临床提供基础理论并提供治疗新策略。方法:本项研究主要包括四方面工作。一、脂筏色谱的构建与枸杞寡糖的筛选。利用离子去垢剂法提取大鼠小胶质细胞脂筏、湿法装柱构建脂筏色谱柱,筛选出具有免疫活性的枸杞寡糖（Lycium barbarum oligosaccharides,LBO）。二、考察LBO对不同细胞的作用。通过Western Blot、ELISA、Ed U实验验证LBO对小胶质细胞的极化作用,对星形胶质细胞的增殖抑制作用以及对神经干细胞的分化影响;通过转录组测序分析LBO对大鼠鼻粘膜外胚层间充质干细胞（EMSCs）的作用及相关机制,并通过Western Blot、ELISA等手段加以验证。三、体外构建LBO/EMSCs/Fibrin复合支架并进行处方优化。通过考察细胞生长状态、LBO释放速率、孔隙率、SEM筛选最佳处方。四、将LBO/EMSCs/Fibrin支架用于大鼠SCI模型的修复。通过BBB评分、旷场实验、足迹测试等行为学实验直观考察复合支架对大鼠后肢运动能力的修复作用;通过HE染色、免疫荧光共定位、BDA神经顺行示踪考察病理组织修复水平;通过Simple Wes检测相关蛋白的表达情况,阐明LBO/EMSCs/Fibrin支架修复SCI机理。结果:一、脂筏色谱高效筛选出具有免疫活性的LBO。HPLC实验结果表明,小胶质细胞脂筏对LBO有特异性亲和力。二、LBO具有多向调节作用。1.对神经细胞:LBO对小胶质细胞具有M2免疫极化作用,对星形胶质细胞增殖有轻度抑制作用且对神经干细胞无明显影响;2.对EMSCs细胞:转录组测序结果表明,LBO可通过上调TNFR2-PGE2通路增强EMSCs的旁分泌作用。三、确定LBO/EMSCs/Fibrin的最佳处方。通过细胞生长、LBO释放、孔隙率、SEM等表征手段确定LBO/EMSCs/Fibrin支架的最佳处方为:Fibrin,25 mg/m L,LBO,200μg/m L,EMSCs,2×10~7cells/m L。四、LBO/EMSCs/Fibrin支架能发挥良好的脊髓修复效能。行为学实验结果表明该LBO/EMSCs/Fibrin支架可显著改善SCI模型的运动能力;HE染色、免疫荧光染色（NF-H/GFAP、Tuj1/GFAP、CD206）、BDA神经示踪结果表明LBO/EMSCs/Fibrin支架促进损伤部位神经元的再生以及M2型小胶质细胞浸润;Simple Wes结果表明LBO/EMSCs/Fibrin支架通过上调PI3K-Akt-m TOR通路促进内源性小胶质细胞的M2极化,改善损伤部位的免疫微环境,从而修复脊髓损伤。结论:枸杞寡糖（LBO）通过上调TNFR2促进PGE2的表达,增强EMSCs的旁分泌作用;LBO/EMSCs/Fibrin在体内通过上调PI3K-Akt-m TOR通路,促进小胶质细胞的M2极化,从而修复脊髓损伤。