【摘 要】
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蒙古冰草(Agrcopyron mongolicum Keng)属于冰草属寒旱生二倍体草本植物,其抗旱、耐盐碱等抗逆基因是饲草及麦类作物的抗性品种改良的优异基因库。WRKY转录因子是植物中特有
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蒙古冰草(Agrcopyron mongolicum Keng)属于冰草属寒旱生二倍体草本植物,其抗旱、耐盐碱等抗逆基因是饲草及麦类作物的抗性品种改良的优异基因库。WRKY转录因子是植物中特有的超级转录调控因子家族,具有多种生物学功能:在植物逆境胁迫响应、代谢发育和生物合成等发挥重要作用,但参与调控蒙古冰草的WRKY转录因子相关研究甚少。本研究基于干旱胁迫下蒙古冰草叶片RNA-Seq数据,克隆得到了AmWRKY1-like基因,通过序列分析、干旱逆境下的mRNA表达丰度、异源烟草亚细胞定位和遗传转化等方法,初步研究了蒙古冰草AmWRKY1-like基因的功能。主要结果如下:1.首次克隆到蒙古冰草Ⅱd型AmWRKY1-like基因,ORF全长为1182bp,编码393个氨基酸,分子量为42318.07Da。2.qRT-PCR检测表明,蒙古冰草Am WRKY1-like基因的mRNA表达丰度受自然干旱、15%PEG-6000诱导,且均为负调控。3.利用同源重组原理及无缝克隆技术,成功构建AmWRKY1-like基因的pART-CAM-AmWRKY1-like过表达载体和pCAM35S-Am WRKY1-like-EGFP瞬时定位载体。4.荧光信号GFP检测揭示,蒙古冰草Am WRKY1-like蛋白定位于异源本氏烟草细胞的细胞核上。5.通过叶盘法转化无菌烟草,经Kana+抗性株系筛选及PCR检测,共获10株T0代转AmWRKY1-like烟草株系。
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