RI基因真核表达载体的构建及其人脐静脉内皮细胞的影响

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuzhenguo_09
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonucleaseinhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialeells,HUVEC)增殖及迁移能的影响。  方法:用RT-PCR方法扩增了RI基因,酶切后将其插入pcDNA3.1-,构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,在脂质体介导下转染人脐静脉内皮细胞HUVEC,通过RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平,Westernblot检测RI、ANG及影响内皮细胞迁移能力重要的2个蛋白MMP-2、MMP-9的表达水平,;CO-IP法检测ANG和RI的相互作用,MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期的分布。  结果:真核表达质粒构建成功;实验组pcDNA3.1-RI细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转pcDNA3.1-空载体组和未转染质粒组)比较,均呈显著性增加(P<0.05),转染RI基因的细胞ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05);MMP-2、MMP-9基因的蛋白表达水平降低(P<0.05);CO-IP法检测到ANG和R工在细胞内能结合;转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVEC细胞后细胞的增殖活力明显降低(P<0.05),G0~G1期比例明显增加,S期减少。  结论:成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达,RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达,在细胞内与ANG结合,从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力。
其他文献
中国的城乡二元体制导致城乡居民生活水平差异较大,小城镇公共服务设施普遍存在标准低、服务效率低的问题.村镇公共服务设施的合理布局直接关系到居民能否公平享用公共服务,
发展农村电商对我国发展以县域经济为代表的区域经济体,具有重大意义。农村电商对推进区域经济发展有重要作用,但当前农村电商在发展中还存在一些问题。而四方联动构建农村电
  资源型小城镇的发展规律,必然要经历建设——繁荣——衰退——转型的过程。探寻资源枯竭型小城镇产业转型时期的转型方法已经成为我国小城镇环境保护和可持续发展的迫切要
会议
二茂铁及其衍生物具有良好的低毒性、热稳定性和细胞穿透性,已成为药物开发中重要的备选物种。吲哚、吲唑和吡喃等杂环化合物是各类消炎和杀菌药物的活性中心,结合二茂铁和杂环分子的特点,本文将两类分子通过环加成手段结合起来,合成了四类杂环化合物,并利用MS、FT-IR、NMR、X射线单晶衍射等手段表征了它们的分子与晶体结构。具体合成方法如下:1、以2-二茂铁乙炔基苯胺为原料,在NaAuCl_4·2H_2O催
学位
  近年来我国小城镇的发展十分迅速,特别是小城镇工业发展更是日新月异,但小城镇工业发展中也存在不少诸如产业结构层次低、乡镇企业布局乱、土地利用集约程度低等一系列问题
会议
  改革开放三十年来,我国小城镇建设取得了巨大的成就,但在现代化的建设浪潮中小城镇的地域性特色正快速消失,城市的形态和结构肌理逐渐破碎。故从小城镇的城市设计角度出发,通
  伴随着旅游业发展的热潮,经济发展的诉求对于风景资源保护的挑战也日益加大,但是国家对于风景资源保护力度也在升级,与风景名胜区相邻相融、关系密切的小城镇在如何发展的问
背景:心血管疾病是人类疾病中致死致残的主要因素之一,其病程中造成病理性损害的各种细胞死亡形式又都经历线粒体通透转换孔(Mitochondrialpermeability transition pore,mPTP)
  长期以来,小城镇建设在学术领域一直受到关注,但是在建设实践的领域却鲜有理论体系支撑,小城镇城市设计就是属于这一类。小城镇的城市设计作为一个实践类型逐步兴起,并根据各
会议
  旅游小城镇“多规合一”具有典型性和紧迫性,结合江苏省宜兴市西渚镇的工作实践,研究经济新常态下旅游小城镇的城镇化模式和空间规划模式,通过与市县对比,分析旅游小城镇“多