论文部分内容阅读
目的： 探讨共载体rAAV-PR39-ADM分泌表达促血管生成因子(PR39)和血管扩张因子(ADM)对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。本实验首先制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，然后将共载体rAAV-PR39-ADM注射在缺血心肌区域，通过B超、血流动力学等检测指标对缺血心肌功能进行评价，最后通过分子生物学手段检测给药区域心肌下游相关因子表达情况。 方法： [1]实验一：选健康成年雄性SD大鼠36只，体重范围在280g±20g，随机分为对照组(I/R＆Saline)、治疗1(TR1)、治疗2(TR2)，每组各12只。实验二：选健康成年雄性SD大鼠48只，体重范围在280g±20g，随机分为治疗组1(TR1)、治疗组2(TR2)、对照组1(CG1)、对照组2(CG2)，每组各12只。 [2]各组大鼠首先建立心肌缺血再灌注损伤模型。实验一，对照组将0.3ml生理盐水通过鼠尾静脉注射；TR1组将0.3ml rAAV-PR39-ADM(3×109pfu)通过鼠尾静脉注射；TR2组将rAAV-PR39-ADM0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部。实验二，TR1组，将共载体rAAV-PR39-ADM0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部；TR2组，将共载体rAAV-PR390.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部；CG1组，将腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部；CG2组，将生理盐水0.3ml注射在缺血再灌注损伤心肌局部。 3．使用心电图对模型进行监测，术后7天分别使用TTC染色、心肌称重实验、血流动力学等手段评价模型及给药方式；利用 B超和血流动力学评价四组大鼠心功能，病理切片用masson染色对心肌梗死纤维化面积(MIA)评价分析。 4．速取心肌组织进行研磨，提取蛋白，用western blot方法检测相关因子表达。 结果： [3]TTC染色大鼠心肌缺血再灌注损伤确切，证明模型制备成功。 [4]心肌局部给药优于外周给药。 3．实验2：各组大鼠术后7天行B超检查，测量左室壁厚度及计算左心室射血分数(EF％)；血流动力学检测，左室收缩末压(left ventricular systolic pressure，LVSP)、左室内压最大上升及下降速率(±LVdp/dt max)，评价心脏功能；病理切片评价心肌梗死面积。TR1组EF%、LVSP、±LVdp/dt max各项指标明显高于TR2、CG1、CG2组；TR2组EF%、LVSP、±dp/dt max高于CG1、CG2组；而CG1、CG2组EF%、LVSP、±LVdp/dt max无统计学差异。TR1、TR2组梗死面积小于CG1、CG2组；而TR1组梗死面积小于TR2组；CG1、CG2组梗死面积无差异。 4．在缺血心肌蛋白中，成功检测到下游低氧诱导因子(HIF-1α)、PR39标签肽(6His)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管扩张因子(ADM)的表达，并对其含量进行分析，TR组高于CG组。 结论： 1．SD大鼠心肌缺血再灌注损伤模型复制成功。 2．治疗组缺血心肌功能得以提高，心肌收缩功能改善，梗死面积有所减小，共载体rAAV-PR39-ADM可能提高了大鼠缺血心肌的功能。 3．心功能改善的机制可能与共载体rAAV-PR39-ADM高表达扩血管因子(ADM)和下游血管内皮生长因子(VEGF)有关。