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肝脏是哺乳动物重要的内脏器官,承担着物质代谢和生物转化的重任,血液丰富,极易受到机体内外多种致病因素的侵袭,引起炎症与损伤。肝损伤是由多种肝脏疾病所产生的病变结果,发生机制颇为复杂。随着对肝损伤发病机制研究的深入,炎症同肝损伤之间的密切联系正日益引起重视。炎症过程涉及多种炎性细胞因子的相互作用,研究证实炎性细胞因子促进肝损伤的发生发展,并抑制机体抗炎免疫应答,其血清中水平与肝脏炎症、肝损伤程度有明显相关性。天然免疫系统是机体抵抗病原微生物入侵感染的最初阶段,在肝损伤及炎症的发病过程中起着重要的作用。适度的天然免疫反应可以增强机体抵抗病原微生物的能力,但是过度亢进的天然免疫往往会导致大量炎性细胞因子的释放,从而引起一些慢性炎性疾病的产生,包括炎症相关性肝损伤乃至肿瘤的发生。因此,深入了解和研究天然免疫负调控机制对于预防和治疗炎症相关性疾病具有重要理论和临床意义。NLRC5(NLR family, CARD domain containing5)作为最近发现的NOD样受体家族成员之一,能够有效抑制机体的天然免疫和炎症反应,可能成为未来免疫相关性疾病的有效治疗靶点。JAK2/STAT3是一条多种细胞因子共用的信号传导途径,可被多种细胞因子激活,积极参与调控机体组织器官的细胞增殖凋亡、免疫应答等生理病理过程。多项研究发现JAK2/STAT3信号通路在天然免疫系统的激活过程中起着关键作用。本研究拟观察NLRC5在急性肝损伤模型中的表达变化,并深入探讨其对RAW264.7活化过程中细胞因子释放的影响及其作用分子机制。采用CCl4腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型,正常组、模型组每组各10只。模型组小鼠一次性腹腔注射CCl4植物油溶液(0.25ml·100g-1);正常组注射等剂量花生油溶液。一天后,取肝组织进行病理组织学检测,并观察NLRC5在腹腔巨噬细胞中的表达变化。通过RT-PCR检测不同浓度LPS刺激RAW264.7细胞中NLRC5的表达。通过脂质体LipofectamineTM2000分别转染pEGFP-C2-NLRC5和NLRC5siRNA到RAW264.7内以观察对LPS诱导的RAW264.7分泌细胞因子的影响,荧光倒置显微镜观察转染效率。体外培养RAW264.7, JAK2/STAT3通路特异性阻断剂AG490预处理12h后用LPS200ng/ml刺激细胞10h,利用RT-PCR和ELISA法观察AG490对NLRC5及细胞因子表达的影响,并观察JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的变化。通过脂质体LipofectamineTM2000转染JAK2siRNA到RAW264.7内以观察JAK2/STAT3对NLRC5及细胞因子表达的影响,并观察通路相关蛋白的表达。结果发现NLRC5在CCl4诱导急性肝损伤模型中mRNA和蛋白表达均明显高于正常组。用不同浓度LPS (0,100ng/ml,200ng/ml,1ug/ml,2ug/ml)分别诱导RAW264.7, NLRC5的表达呈先上升后下降的趋势,在200ng/ml刺激10h时表达量最高。与对照组相比,过表达NLRC5可以显著抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6的表达。相反转染NLRC5siRNA进入RAW264.7可以明显增加LPS诱导的TNF-α和IL-6的释放。在AG490处理的RAW264.7中,LPS诱导的NLRC5mRNA和蛋白表达的表达显著降低,而IL-6和TNF-α的表达却明显增加,提示JAK2/STAT3能正调控NLRC5的表达。相似地,转染JAK2siRNA进入RAW264.7可以明显降低LPS诱导的NLRC5的表达,却能增加IL-6和TNF-α的分泌。以上研究表明,NLRC5能负性调控LPS诱导的细胞因子IL-6和TNF-a的表达,且能被JAK2/STAT3信号通路调控。