【摘 要】
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目的:用基因工程技术改造人IFN-β高表达毕赤酵母工程菌株,探讨改造方法与技术路线。方法:密码子优化合成IFN-β基因,克隆到pPICZαA质粒上,经鉴定后,内切酶Sac I线性化,电转化到毕赤酵母宿主菌GS115,经PCR鉴定后,再经斑点免疫印迹法筛选出高表达的工程菌株GI-97,对工程菌株GI-97进行诱导表达条件优化,甲醇诱导出IFN-β,经SDS-PAGE分析,用ELISA和Western
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目的:用基因工程技术改造人IFN-β高表达毕赤酵母工程菌株,探讨改造方法与技术路线。方法:密码子优化合成IFN-β基因,克隆到pPICZαA质粒上,经鉴定后,内切酶Sac I线性化,电转化到毕赤酵母宿主菌GS115,经PCR鉴定后,再经斑点免疫印迹法筛选出高表达的工程菌株GI-97,对工程菌株GI-97进行诱导表达条件优化,甲醇诱导出IFN-β,经SDS-PAGE分析,用ELISA和Western blotting鉴定免疫活性,用FPLC-Q和S-200纯化,用HPLC测纯度后,用WISH-VSV细胞病变抑制法病毒攻毒试验鉴定生物活性,同时对IFN-β蛋白的糖基化位点进行分析。将密码子优化合成的透明颤菌血红蛋白基因克隆到pPICZαA上,线性化后电转到工程菌株GI-97,形成新的工程菌株GI-97-VHB,工程菌株GI-97-VHB表达透明颤菌血红蛋白和IFN-β,测定菌密度OD600值和IFN-β浓度,鉴定新的工程菌株GI-97-VHB表达情况。结果:通过电转化方法成功将酶切线性化重组表达质粒DNA整合入宿主菌基因组,并在甲醇诱导条件下成功表达出具有生物学活性的目的蛋白。用ELISA和western blotting鉴定IFN-β的免疫活性,WISH-VSV病毒系统对目的蛋白的抗病毒生物活性进行了测定为1000-1300IU/mL,用BCA法测定表达量为601 mg/L,对IFN-β蛋白的糖基化位点分析,证明我们表达的IFN-β蛋白有糖基化位点,说明工程菌株改造成功并命名为GI-97。将透明颤菌血红蛋白基因整合到工程菌株GI-97,命名为GI-97-VHB,表达透明颤菌血红蛋白和IFN-β,经研究证明在正常通氧和低氧组,透明颤菌血红蛋白能提高GI-97菌密度和IFN-β的表达量。结论: IFN-β基因整合到毕赤酵母基因组上具有高的表达量和免疫活性、生物活性和糖基化位点。透明颤菌血红蛋白的表达能提高毕赤酵母的菌密度和IFN-β的表达量。
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目的:采用免疫组织化学的方法,分析BRAF突变与未突变型PTC患者原发癌灶中ILK蛋白的表达差异,探究ILK与恶性生物学行为相关的病理参数,协助临床早期筛选出转移风险高、预后差的高危PTC病种;通过培养离体BRAF突变的甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP,采用多项分子技术以检测中药夏枯草干预B-CPAP细胞恶性生物学行为指标的变化,实验为了探究夏枯草作用于甲状腺癌的具体机制,以期为中医药防治甲状腺癌开
目的:探讨穴位注射对肾精亏损型耳鸣的治疗效果,为穴位注射治疗耳鸣提供有效的临床依据。方法:本研究以符合纳入标准的66例耳鸣患者为对象,按照随机数字表法分为治疗组33例,对照组33例。基础治疗为口服六味地黄丸,治疗组在口服六味地黄丸基础上联合穴位注射,对照组在口服六味地黄丸基础上联合常规针刺,两组均治疗4周,记录治疗前、治疗4周后中医各证候积分、耳鸣残疾评估量表（THI）和耳鸣严重程度评分情况,并进
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目的:本研究以慢性疲劳综合征（Chronic Fatigue Syndrome,CFS）为疾病载体,采用代谢组学技术,对比分析“柔筋益髓”推拿法治疗前后CFS患者尿液中的代谢产物,找出具有显著差异的尿液代谢物,对比数据库,寻找差异代谢物的代谢通路,探索“柔筋益髓”推拿法治疗CFS的作用机制,为临床应用“柔筋益髓”推拿法防治CFS提供科学的依据。方法:选取符合诊断标准的30例CFS患者,进行“柔筋益
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目的探究帕利哌酮缓释片对精神分裂症患者的治疗效果。方法研究对象为本院2018年1月～2019年1月诊治的62例精神分裂症患者,采用随机数字表法将其分为甲、乙两组,每组31例。甲组给予阿立哌唑治疗,乙组应用帕利哌酮缓释片进行医治。比较两组的治疗效果。结果两组治疗总有效率对比无显著性差异（P>0.05）;乙组不良反应发生率低于甲组,差异显著（P<0.05）;治疗前,两组阳性与阴性症状量表（PANSS）
目的:通过收集治疗组、对照组治疗前后各项指标评分的变化对比,采用统计学方法进行分析,评价益气固脱方联合经会阴直肠切除吻合术治疗气虚下陷型直肠脱垂的疗效。通过相关机理的分析,为临床治疗气虚下陷型直肠脱垂提供理论依据。方法:选取2017年4月至2019年4月期间,导师张龙江教授临床治疗的满足纳入、排除标准的60例直肠脱垂病人,采用随机对照的试验研究方法,对照组30例给予手术治疗,治疗组30例在手术治疗
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