水稻草状矮化病毒对褐飞虱翅型分化的影响

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水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV),是纤细病毒属的成员之一,可以引起水稻草状矮化病(Rice grassy stunt disease),简称水稻草矮病,是热带和亚热带地区水稻上的重要病害之一,严重时甚至可造成水稻的绝产。该病毒由昆虫介体褐飞虱(Nilaparvata lugens)以持久、增殖性方式传播。褐飞虱是一种迁飞性害虫,成虫具有明显的翅二型现象。有研究表明,病毒的侵染会对褐飞虱的翅型分化产生影响。本课题通过生物学统计实验、荧光定量PCR实验、酵母双杂交实验、亚细胞共定位实验和原核表达实验对该问题进行了研究,研究结果如下:1、生物学统计实验的结果表明,褐飞虱携带RGSV种群和无毒种群成虫的翅型分化存在显著差异,其中无毒虫的短翅型比例为23.17±0.56%,长翅型比例为60.43±0.22%。而饲过毒的褐飞虱短翅型的比例为36.26±0.42%,长翅型比例为52.32±1.16%。2、通过实时荧光定量qRT-PCR实验对褐飞虱翅型分化相关基因flightin、 Tnc、Titin、LN-a2在褐飞虱体内的表达量进行了测定,结果表明,RGSV侵染后,各基因均表现为下调。3、成功的构建了酵母表达载体pGADT7-flightin。通过酵母双杂交实验得出褐飞虱flightin蛋白能够与RGSV的P1,P3,P5蛋白产生互作。4、成功构建了瞬时表达载体pEarly gate 101-flightin和pEarly gate 102-flightin。通过亚细胞共定位实验进一步验证了flightin与RGSV的P1,P3,P5蛋白之间的互作。5、成功构建了原核表达载体pDEST17-flightin,制备了褐飞虱flightin基因的多克隆抗体,Western blot实验的检测结果表明,所制备的抗血清能够特异性地检测褐飞虱体内的flightin蛋白,间接ELISA检测结果表明所制备的抗体效价为1:6400。综上所述,本研究基本明确了水稻草状矮化病毒对褐飞虱翅型分化的影响,并通过分子生物学相关实验筛选到部分关键基因,为进一步的研究奠定了良好的基础。
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