长庆油田石油污染土壤的原位修复微生物的筛选和鉴定

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangleisxh1234
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本论文论述了石油土壤污染的起因、危害及当前国际国内对于土壤石油污染的最新修复技术。通过对采集于长庆油田地区的石油污染土壤微生物的分离筛选,初步获得了182株具有石油降解能力的菌株,选取其中20株降解能力较好的菌株进行了降解特性分析,并选取其中最高效的菌株组合成高效降解菌群C1。通过对土壤背景值的测定,找出最合适的营养物质配比。采用单因素和正交设计的方法,得到最佳的外界环境因素。最后,利用分子生物学的手段,初步分析土壤中石油降解菌的多样性,获得组成C1的4株菌16S rDNA的序列,并与相关菌株共同构建系统发育树,获得他们在分类学上的地位。(1)实验选用以石油为碳源的选择性培养基筛选出具有石油降解能力的菌株,初筛得到单菌182株。复筛分析了初筛菌株对正十六烷、环己烷和菲的降解能力,进而得到降解效果比较好的单菌4株,组合出一组高效菌群C1。(2)通过实验,分析了采样土壤的部分理化性质。其中土壤样品中的磷含量为0.7652 g·kg-1,氮含量为0.5748 g·kg-1,有机质含量为169.73 g·kg-1,pH值为8.12。根据生物降解过程中对氮、磷营养盐的要求大约为mC:mN:mP=100:5:l,则土壤中的氮含量应大于4.9225 g·kg-1,土壤中的磷含量应大于0.9845 g·kg-1。因此,对微生物降解石油的生化过程而言,营养状况很不平衡,特别是氮素,缺量很大,为了使降解率提高,我们必须添加额外的营养物质,主要是N源和P源。(3)通过正交设计实验,我们得到:在1000 mL的培养基中应加入KNO3 6g,K2HPO4 2g,在37℃,pH为7,转速为180 rpm时,C1对石油的降解率可以到达78.5%。通过气相色谱分析,从质上进一步验证了C1的石油降解能力。(4)利用分子生物学的方法获得了土壤样本中20株石油降解菌的DNA,酶切后,分析了它们种群的多样性。通过PCR扩增,获得了组成C1的4株菌的16S rDNA全序列,通过系统发育树,获得了他们在分类学上的基本地位,通过GeneBank的比对,结果CQ-1为芽孢杆菌属(Bacillus),CQ-2和CQ-9均为不动杆菌属(Acinetobacter),CQ-13为威廉土氏菌属(Williamsia)。
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