论文部分内容阅读
凋亡抑制蛋白样蛋白2(Inhibitor of apoptosis protein-like protein-2,ILP-2)是凋亡抑制蛋白家族(Inhibitors of apoptosis proteins,IAPs)成员之一,基因位于人染色体(19q13.3-13.4)上,具有高度保守性,其编码产物能够抑制细胞的凋亡。我们项目组前期研究发现ILP-2在乳腺癌血清中含量较高,且能促进乳腺癌细胞的生长,提示ILP-2在乳腺癌的发生发展中具有重要的意义。本研究拟通过体内实验进一步探究ILP-2对乳腺肿瘤生长的影响及分子机制,为明确ILP-2可作为乳腺癌靶向治疗的分子靶及研发相应的抗癌药物提供实验依据。本研究利用慢病毒载体介导RNAi技术构建人源ILP-2干扰慢病毒载体,将其转入人乳腺癌细胞MCF-7中,用嘌呤霉素筛选得到敲低ILP-2表达的稳转株,且用免疫印迹法(Western Blot,WB)检测稳转株(MCF-7-Control、MCF-7-ILP-2-sh3、MCF-7-ILP-2-sh5)中ILP-2的表达,结果显示MCF-7-ILP-2-sh5稳转株的ILP-2蛋白表达显著降低,表明敲低ILP-2表达的MCF-7稳转株构建成功。采用CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测三组稳转株的生长活性,结果显示靶向敲低ILP-2表达的稳转株生长增殖速度明显减慢,说明ILP-2对乳腺癌细胞的生长具有促进作用。将MCF-7-ILP-2-sh5稳转株与对照稳转株(MCF-7-Control)移植于裸鼠皮下组织,结果显示干扰组的移植瘤体积明显较对照组小,表明敲低ILP-2的表达能有效地抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长。采用Western Blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,RT Q-PCR)、免疫组化进一步探讨ILP-2促进乳腺肿瘤生长的作用机制,结果显示,下调ILP-2不影响Chk2的表达,但上调p-Chk2和Caspase-3,说明ILP-2促进乳腺肿瘤生长与Chk2调控的信号通路相关。