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背景：
西瑞香素(Daphnoretin)是瑞香烷类的原酸酯二萜，作为双香豆素类衍生物，在菊科、芸香科、云实科、豆科以及瑞香科植物中均有发现。瑞香科植物广泛分布，目前约有40属800种，我国有l0属90种。研究发现西瑞香素具有抗炎、抗肿瘤、抗真菌、抗病毒等治疗作用。穿心莲，本品为爵床科植物穿心莲的干燥地上部分。具有祛热解毒、消炎止痛之功效。穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分之一，是一个半日花烷型二萜内酯类化合物。具有解热、抗病原微生物、抗炎抗菌、抗心血管疾病、抗肿瘤、抗生育、抗蛇毒、保肝利胆、抗氧化和增强免疫等多种作用。本实验通过西瑞香素和穿心莲内酯联合用药，以研究对西瑞香素吸收的影响。
目的：
通过模拟小肠吸收环境的细胞转运模型，研究在西瑞香素与穿心莲内酯联合用药时，穿心莲内酯对西瑞香素吸收的影响。通过建立测定大鼠血浆中西瑞香素的液相色谱方法，研究穿心莲内酯对西瑞香素在大鼠体内的药动学影响，从而进一步研究联合应用穿心莲内酯对西瑞香素的体内过程的影响。
方法：
首先建立细胞膜生长程度、细胞分化程度和细胞膜致密性符合实验要求和标准的Transwell细胞转运模型。在建立模型的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天，使用细胞电阻仪检测单层细胞膜的电阻值，并计算细胞膜的TEER值，以确定细胞膜的生长程度。使用AKP检测试剂盒先建立AKP标准曲线，根据标准曲线，使用酶标仪检测Transwell转运小室的上室与下室碱性磷酸酶的吸光度，计算出碱性磷酸酶的含量比值，确定单层细胞膜中细胞的分化程度。在实验开始前进行荧光黄实验，使用酶标仪检测荧光强度，计算出其表观分布系数，根据表观分布系数验证细胞模型的完整性，以确保实验数据的准确性。在此基础上检测在联合用药时穿心莲内酯对西瑞香素吸收的影响。在细胞实验的基础上进行动物实验。首先取大鼠空白血浆建立西瑞香素血浆样品测定方法，然后取SD大鼠12只，随机分为2组，单用西瑞香素组与西瑞香素和穿心莲内酯联合用药组，实验前对大鼠进行适应性喂养后，进行称重，按照体重经尾静脉给药(10mg/kg)，在给药后的5min、10min、15min、30min、45min、1h、2h、3h、5h、8h经眼眶静脉丛取血，根据血浆样品处理方法，取血浆样品0.2ml,以10000~12000rmb的转速进行离心处理，根据建立的西瑞香素液相色谱方法，检测不同时间点中西瑞香素的含量，研究联合用药时穿心莲内酯对西瑞香素体内药动学的影响。
结果：
使用细胞电阻仪检测Caco-2细胞Transwell转运模型的跨膜电阻，建立Caco-2细胞生长曲线，在培养21天时到达TEER值的顶峰，满足大于等于500Ω·cm2的实验要求。检测Transwell转运装置的上下小室中碱性磷酸酶的浓度，当培养至21天时检测上室比下室碱性磷酸酶浓度比值大于3倍，可以进行实验。实验前使用荧光黄实验检测单细胞膜的致密性，经检测Papp值通过检测样品中的荧光黄表观分布系数值为7±0.05×10-7cm/s，未接种细胞的小室荧光黄表观分布系数Papp值为5.1×10-5cm/s。接种细胞小室Papp值满足通透实验要求小于1×10-6cm/s的标准。加药后分别在0.5h、1h、1.5h、2h时间点取样处理，使用HPLC法检测其浓度，实验数据表明西瑞香素与穿心莲内酯联用组较单用西瑞香素组样品中西瑞香素浓度明显降低。
建立西瑞香素在大鼠血浆中的测定方法(HPLC)，并对方法学进行验证，来检测大鼠血浆中西瑞香素含量。实验采用尾静脉给药，在给药后的不同时间点经眼眶静脉丛取血，样品按照血浆样品处理后，进样，用HPLC法检测样品中西瑞香素的浓度，建立时间-浓度曲线。使用PK软件进行药代动力学数据处理，联合用药组t1/2α均值为3.1493，AUC均值为1198.1669ug.min.ml-1，平均分布相半衰期为3.1493±1.0614min，平均消除半衰期为112.3697±45.7618min，单用西瑞香素组t1/2α均值为4.3653，AUC均值为2314.2562ug.min.ml-1，平均分布相半衰期为4.3653±0.5863min，平均消除半衰期为250.6157±13.6037min。实验结果表明西瑞香素与穿心莲内酯联用组的西瑞香素较单用西瑞香素组半衰期变短，清除率升高，AUC减小且经统计学处理有明显差异性(P＜0.05)。
结论：
1、在Caco-2细胞Transwell转运模型中西瑞香素与穿心莲内酯联用会导致西瑞香素的吸收明显降低。
2、通过对大鼠体内药动学的研究表明，联合应用穿心莲内酯对西瑞香素体内过程有明显影响，较单用西瑞香素组半衰期变短，清除率升高，AUC减小,具体机制有待进一步研究。
西瑞香素(Daphnoretin)是瑞香烷类的原酸酯二萜，作为双香豆素类衍生物，在菊科、芸香科、云实科、豆科以及瑞香科植物中均有发现。瑞香科植物广泛分布，目前约有40属800种，我国有l0属90种。研究发现西瑞香素具有抗炎、抗肿瘤、抗真菌、抗病毒等治疗作用。穿心莲，本品为爵床科植物穿心莲的干燥地上部分。具有祛热解毒、消炎止痛之功效。穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分之一，是一个半日花烷型二萜内酯类化合物。具有解热、抗病原微生物、抗炎抗菌、抗心血管疾病、抗肿瘤、抗生育、抗蛇毒、保肝利胆、抗氧化和增强免疫等多种作用。本实验通过西瑞香素和穿心莲内酯联合用药，以研究对西瑞香素吸收的影响。
目的：
通过模拟小肠吸收环境的细胞转运模型，研究在西瑞香素与穿心莲内酯联合用药时，穿心莲内酯对西瑞香素吸收的影响。通过建立测定大鼠血浆中西瑞香素的液相色谱方法，研究穿心莲内酯对西瑞香素在大鼠体内的药动学影响，从而进一步研究联合应用穿心莲内酯对西瑞香素的体内过程的影响。
方法：
首先建立细胞膜生长程度、细胞分化程度和细胞膜致密性符合实验要求和标准的Transwell细胞转运模型。在建立模型的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天，使用细胞电阻仪检测单层细胞膜的电阻值，并计算细胞膜的TEER值，以确定细胞膜的生长程度。使用AKP检测试剂盒先建立AKP标准曲线，根据标准曲线，使用酶标仪检测Transwell转运小室的上室与下室碱性磷酸酶的吸光度，计算出碱性磷酸酶的含量比值，确定单层细胞膜中细胞的分化程度。在实验开始前进行荧光黄实验，使用酶标仪检测荧光强度，计算出其表观分布系数，根据表观分布系数验证细胞模型的完整性，以确保实验数据的准确性。在此基础上检测在联合用药时穿心莲内酯对西瑞香素吸收的影响。在细胞实验的基础上进行动物实验。首先取大鼠空白血浆建立西瑞香素血浆样品测定方法，然后取SD大鼠12只，随机分为2组，单用西瑞香素组与西瑞香素和穿心莲内酯联合用药组，实验前对大鼠进行适应性喂养后，进行称重，按照体重经尾静脉给药(10mg/kg)，在给药后的5min、10min、15min、30min、45min、1h、2h、3h、5h、8h经眼眶静脉丛取血，根据血浆样品处理方法，取血浆样品0.2ml,以10000~12000rmb的转速进行离心处理，根据建立的西瑞香素液相色谱方法，检测不同时间点中西瑞香素的含量，研究联合用药时穿心莲内酯对西瑞香素体内药动学的影响。
结果：
使用细胞电阻仪检测Caco-2细胞Transwell转运模型的跨膜电阻，建立Caco-2细胞生长曲线，在培养21天时到达TEER值的顶峰，满足大于等于500Ω·cm2的实验要求。检测Transwell转运装置的上下小室中碱性磷酸酶的浓度，当培养至21天时检测上室比下室碱性磷酸酶浓度比值大于3倍，可以进行实验。实验前使用荧光黄实验检测单细胞膜的致密性，经检测Papp值通过检测样品中的荧光黄表观分布系数值为7±0.05×10-7cm/s，未接种细胞的小室荧光黄表观分布系数Papp值为5.1×10-5cm/s。接种细胞小室Papp值满足通透实验要求小于1×10-6cm/s的标准。加药后分别在0.5h、1h、1.5h、2h时间点取样处理，使用HPLC法检测其浓度，实验数据表明西瑞香素与穿心莲内酯联用组较单用西瑞香素组样品中西瑞香素浓度明显降低。
建立西瑞香素在大鼠血浆中的测定方法(HPLC)，并对方法学进行验证，来检测大鼠血浆中西瑞香素含量。实验采用尾静脉给药，在给药后的不同时间点经眼眶静脉丛取血，样品按照血浆样品处理后，进样，用HPLC法检测样品中西瑞香素的浓度，建立时间-浓度曲线。使用PK软件进行药代动力学数据处理，联合用药组t1/2α均值为3.1493，AUC均值为1198.1669ug.min.ml-1，平均分布相半衰期为3.1493±1.0614min，平均消除半衰期为112.3697±45.7618min，单用西瑞香素组t1/2α均值为4.3653，AUC均值为2314.2562ug.min.ml-1，平均分布相半衰期为4.3653±0.5863min，平均消除半衰期为250.6157±13.6037min。实验结果表明西瑞香素与穿心莲内酯联用组的西瑞香素较单用西瑞香素组半衰期变短，清除率升高，AUC减小且经统计学处理有明显差异性(P＜0.05)。
结论：
1、在Caco-2细胞Transwell转运模型中西瑞香素与穿心莲内酯联用会导致西瑞香素的吸收明显降低。
2、通过对大鼠体内药动学的研究表明，联合应用穿心莲内酯对西瑞香素体内过程有明显影响，较单用西瑞香素组半衰期变短，清除率升高，AUC减小,具体机制有待进一步研究。