【摘 要】
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目的观察不同浓度的苯并(a)芘在不同时间对原代培养的大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区甲基化程度的影响。方法(1)采用组织块培养法培养原代大鼠气管-支气管
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目的观察不同浓度的苯并(a)芘在不同时间对原代培养的大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区甲基化程度的影响。方法(1)采用组织块培养法培养原代大鼠气管-支气管上皮细胞；(2)噻唑兰(MTT)还原实验检测系列苯并(a)芘浓度和不同作用时间对原代大鼠气管-支气管上皮细胞增殖活性的影响；(3)应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测不同浓度的苯并(a)芘对原代大鼠气管-支气管上皮细胞p16、RASSF1A基因启动子区甲基化程度的影响。结果(1)在本实验室首次成功建立了用组织块培养法培养原代大鼠气管-支气管上皮细胞的方法；(2)MTT实验结果显示苯并(a)芘浓度在10.0μmol/L及以下时，72h内大鼠气管-支气管上皮细胞抑制率均小于50%，具有明显的抑制增殖作用，并呈剂量依赖性；(3)以0.1、1.0、10μmol/L的苯并(a)芘分别处理原代大鼠气管-支气管上皮细胞24h、48h、72h后，发现p16和RASSF1A基因启动子区均未发生甲基化，并通过测序验证。结论(1)组织块培养法是培养原代大鼠气管-支气管上皮细胞的较好方法，方法简便，易操作；(2)苯并(a)芘对大鼠气管-支气管上皮细胞的毒性随着苯并(a)芘浓度的增大而增大，具有明显的抑制增殖作用，并呈剂量依赖性；(3)0.1、1.0、10μmol/L的苯并(a)芘对原代大鼠气管-支气管上皮细胞分别作用24h、48h、72h，不会引起p16、RASSF1A基因启动子区甲基化。
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