神经病理性疼痛(neuropathic pain)是中枢或外周神经系统损伤或病变引起的疼痛综合征，以自发性疼痛、痛过敏和痛超敏为特征，严重影响人类的生活质量。目前临床上使用的镇痛药物并不能获得十分满意的治疗效果。1933年，Monadesser最早将蛇毒用于临床治疗，用提取的眼镜蛇毒治疗癌痛病人获得显著的镇痛效果。后来美国的Hynson,Westco&Duning公司将蛇毒制成两种镇痛药Cobroxin和Nyloxin，前者用于治疗顽固性疼痛及恶性肿瘤痛，后者用于治疗关节痛，已列入美国药物局方中。因此，蛇毒作为镇痛药物引起了研究者的注意。二十世纪早期蛇毒镇痛的研究多是作用于急性生理性疼痛模型。随着疼痛机制的深入研究，人们发现急性生理性疼痛和慢性病理性疼痛的发生机制有着明显的差别。因此，蛇毒对病理性疼痛是否具有镇痛作用及其机制如何尚不清楚。最近研究报道免疫调节与炎性反应在病理性疼痛的发生和发展过程中具有重要的作用，免疫样胶质细胞以及促炎性细胞因子成为病理性疼痛研究的重点。那么蛇毒对病理性疼痛的镇痛作用是否与其免疫调节和抗炎作用有关有待于进一步研究。因此，本课题拟从中华眼镜蛇毒中分离纯化得到具有镇痛活性的单一成分，采用L5脊神经结扎并剪断的大鼠神经病理性疼痛模型，观察分离得到的单一成分是否具有抗大鼠神经病理性疼痛的作用，以及探讨其作用机制是否与脊髓胶质细胞有关，为神经病理性疼痛开辟新的有效治疗途径和研制开发新的药物提供一定的实验基础和理论依据。　　 方法及结果：　　 ⑴运用亲和层析、凝胶过滤层析两步柱层析法从中华眼镜蛇粗毒中分离得到具有镇痛活性的蛋白成分，根据来源，命名为眼镜蛇镇痛素(najanalgesin)。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，高效液相(HPLC)，质谱和氨基酸测序的方法，检测najanalgesin的纯度，相对分子质量和N端氨基酸组成。结果表明najanalgesin纯度为96.88％，相对分子量质为6.7 kD。应用生物信息学工具对najanalgesin的氨基酸序列进行检索分析后发现其与眼镜蛇蛇毒中的心脏毒素具有很高的相似性。通过蛙心实验证实眼镜蛇镇痛素(najanalgesin)为一种心脏毒素。　　 ⑵观察najanalgesin对L5脊神经结扎并剪断引起的神经病理性疼痛大鼠是否具有镇痛作用及其影响因素。结果显示腹腔注射najanalgesin可显著抑制神经病理性疼痛大鼠的机械性痛敏和热痛敏，而且发现单次腹腔注射najanalgesin对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用持续时间可长达1周。鞘内给予najanalgesin同样对神经病理性疼痛大鼠的机械性痛敏产生明显的抑制作用。预先给予阿片肽受体拮抗剂纳络酮和胆碱能受体拮抗剂阿托品能部分阻断najanalgesin的镇痛作用。以上结果提示najanalgesin对神经病理性疼痛大鼠具有中枢和外周镇痛作用，其镇痛作用与内源性阿片肽系统和中枢胆碱能系统有关。　　 ⑶探讨najanalgesin对L5脊神经结扎并剪断引起的神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用是否与脊髓背角的胶质细胞以及JNK信号蛋白有关。我们观察到神经病理性疼痛大鼠模型建立后出现明显的机械性痛敏，而鞘内给予najanalgesin后对大鼠机械性刺激的痛阈显著提高。如果预先鞘内给予胶质细胞的阻断剂氟代柠檬酸能显著增强najanalgesin的镇痛作用，而提前鞘内给予小胶质细胞的阻断剂米诺环素并不影响najanalgesin的镇痛作用，结果提示najanalgesin对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用可能与脊髓星型胶质细胞有关。进一步通过免疫组织化学染色和免疫印迹实验技术观察神经病理性疼痛大鼠以及鞘内给予najanalgesin后，脊髓背角星型胶质细胞的标记物(glial fibrilary acidic protein，GFAP)的分布和激活的情况。实验结果发现神经病理性疼痛大鼠模型建立后，脊髓背角的星型胶质细胞GFAP表达明显增加，而给予najanalgesi后，脊髓背角的星型胶质GFAP激活明显降低。同样发现L5脊神经损伤后脊髓背角星型胶质细胞内p-JNK蛋白以及其下游p-c-Jun蛋白表达显著增加，但鞘内注射najanalgesin可以显著抑制星型胶质细胞内的p-JNK以及c-Jun蛋白的上调反应。结果提示najanalgesin对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用与脊髓星型胶质细胞和胞内JNK信号分子及其下游c-Jun蛋白有关。　　 结论：　　 ①通过两步柱层析法获得的najanalgesin纯度为96.88％(HPLC)，相对分子质量为6.74 kDa，同源性检索和蛙心实验证实najanalgesin是一种心脏毒素。　　 ②成功复制了L5脊神经结扎并剪断的大鼠病理性疼痛模型，产生明显的、稳定诱发性机械性痛敏和热痛敏，存在“镜像痛”。　　 ③Najanalgesin对病理性疼痛大鼠具有外周镇痛作用，镇痛作用强，持续时间长。　　 ④Najanalgesin对病理性疼痛大鼠具有中枢镇痛作用，并与中枢胆碱能和阿片肽系统有关。　　 ⑤Najanalgsin通过抑制脊髓星型胶质细胞的激活和JNK蛋白表达的升高对病理性疼痛大鼠产生镇痛作用。