论文部分内容阅读
牛大力是美丽崖豆藤(Millettia speciosa Champ.)的根，一直以来被广泛用作一种药食同源中药，具有较高的药用价值和食用价值，长期以来受到人们大量的关注。它具有舒筋活络、清热止咳、润肺滋肾等功效，同时可用来制作药膳、药酒、煲汤，还是多种中成药的主要原料。近几十年来，大量研究表明:牛大力提取物具有调节免疫系统、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、祛痰、镇咳、平喘以及保肝等作用。 与此同时，目前使用的抗疲劳药物多具有较大的副作用，因此从中药中寻找新的天然高效安全的抗疲劳药物前体是目前研究人员比较关注的一个方面。而具有抗疲劳活性的牛大力成为众多研究人员研究的对象。 本课题分别用热水和85％乙醇两种方式对牛大力进行提取。水提液经离心后上清液通过膜分离设备，根据所溶物质分子量大小，将其分为高、低两个分子量段(LM和HM)，再进行醇沉得到的四个粗多糖组分LM-1、LM-2、HM-1和HM-2。醇提液先合并、减压浓缩，然后再用乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，完了剩下的部分称之为水溶性部分(WSP)。测得牛大力水溶部分的多糖含量为62.3％，蛋白质含量为31.7％。 不同的粗多糖组分(LM-1、LM-2、HM-1和HM-2)先进行Sevag法脱蛋白，再使用离子交换柱色谱(DEAE-52cellulose)进行脱色和初步分离，之后用凝胶柱色谱(Sephadex G-100)对其进行纯化，在LM-2组分中得到一个牛大力多糖(LM-2-1)，通过高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)检测得到一个单一狭窄对称峰，分子量Mw约为190000Da(Mz/Mw=1.010036)。还利用了红外、紫外、核磁共振波谱技术(1HNMR、13C NMR、COSY、HMQC和HMBC)对其结构进行了初步的分析与表征。 利用体内(小鼠负重游泳、常压耐缺氧和爬杆)和体外抗疲劳(抗氧化)活性实验对LM-1、LM-2、HM-1和HM-2的抗疲劳活性进行了评价。结果表明:与空白对照组(NC)比较，LM-2高浓度组(LM-2-H)的小鼠在力竭游泳后血乳酸含量和尿素氮含量明显降低(P＜0.05)，血清SOD含量也有较大的增加，同时爬杆时间延长率最大(P＜0.05);HM-1和HM-2混合低浓度组(HM-1&HM-2-L)相比NC组，小鼠常压耐缺氧时间延长较明显(P＜0.05)，力竭游泳后肌糖元的含量明显增加(P＜0.05)，尿素氮以及乳酸含量都显著降低(P＜0.05)。 体外抗氧化活性实验结果显示:LM-1、LM-2、HM-1和HM-2在0.5-8.0mg/mL的浓度范围内都具有较好的清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基、羟基自由基的活性和还原能力，并且都呈现明显的量效关系;在0.05-0.4mg/mL范围内呈现很好的Fe2+络合能力。其中LM-1清除活性最好的是对超氧阴离子自由基;LM-2清除活性最佳的是对DPPH自由基，同时对Fe2+络合能力也最高;HM-1的羟基自由基的清除能力最强;HM-2的还原能力最高。 综上所述，牛大力水溶性成分中的主要成分为多糖，其通过降低血中乳酸和尿素氮含量、增加血清中SOD含量的方式，体现抗疲劳活性。同时，实验表明根据体内和体外抗疲劳活性结果具有一定对应关系，说明牛大力多糖在体内的抗疲劳活性可能还包括抗氧化作用。今后，在本研究基础上，还需要进一步了解牛大力多糖组成和高级结构，为明确结构与抗疲劳活性的构效关系提供更多的信息，为我区牛大力的良种选育繁育、规范化种养技术以及深加工提供重要的数据。