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海南霉素是一种聚醚类抗生素,是用于防治鸡球虫病的原创性专用药物。目前海南霉素主要用于防治畜禽球虫病,特别是在鸡场球虫对现有抗球虫药存在抗药性的情况下,海南霉素的效果尤为显著。本试验旨在通过对海南霉素钠预混剂在鸡体内的药动学和生物利用度研究,了解海南霉素钠预混剂口服给药在鸡体内的药代动力学特征。该研究对丰富和完善国产一类新兽药的临床药理学资料具有重要现实意义。1.建立血浆中海南霉素的HPLC-MS/MS测定方法选择ESI+电离模式,将制备好的质谱调谐溶液通过质谱仪针泵恒流方式进样,先进行Q1扫描(Q1 Scan),首先确定海南霉素的母离子。然后通过产物离子扫描方式(Product Ion Scan),扫描范围为m/z 600-1000,确定海南霉素母离子的子离子质荷比。根据定量分析流程,确定海南霉素的母离子为m/z907.6,子离子为m/z863.6和m/z845.6,优化得到碰撞能(CE)值为32.0eV,碰撞室射出电压(CXP)为12.0V,摄入电压(EP)为 10.0 V。鸡血浆中的海南霉素以液液萃取法提取,采用Ultimate UHPLC XB-C18(1.8 lμm,2.1×100 mm)色谱柱和等度洗脱分离待测样品中的各组分;使用三重四级杆质谱仪的多反应监测(MRM)模式进行定量分析,外标法定量。流动相A是乙腈,B是0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸铵),流速为0.4 mL/min,进样量为5μL。在选定的色谱条件下,海南霉素在1-500 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999。本方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.5 ng/mL和1 ng/mL。高、中、低三个浓度空白血浆添加样品(1、100、500 ng/mL)的批间回收率分别为95.6±6.36%、101.6±5.78%、94.0±5.88%,日内变异系数分别为 5.42-7.65%、4.94-6.22%和 5.44-6.80%,日间变异系数在5.70-6.66%之间。标准储备液和待测样品中的待测物在给定条件下均具有较高的稳定性,基质效应不明显。方法学研究结果表明,本试验建立的鸡血浆中海南霉素含量HPLC-MS/MS测定方法适用于鸡血浆中海南霉素含量的测定。2.海南霉素在鸡体内的药动学及利用度研究16只健康AA鸡(平均体重:3±0.51 kg)随机分成2组,每组8只。采用平行试验设计分别进行口服给药和静脉注射给药药动学研究。第1组1-8号鸡单剂量经口灌服1.5 mg/kg bw的海南霉素钠溶液,第2组9-16号鸡单剂量静脉注射1.5 mg/kg bw的海南霉素钠注射液(相当于7.5 mg/kg混饲),给药前禁食12 h,给药2 h后恢复正常饮水。在预定时间点采集血样,并通过HPLC-MS/MS三重四级杆检测器分析血浆中海南霉素的含量,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(90:10,V/V)。实测血药浓度-时间数据使用Winnonlin5.2药动学分析软件拟合药动学参数。结果显示,口服给药组的平均消除半衰期(T[/2)为28.07 h,平均滞留时间(MRT)为8.40h,在血浆中的达峰时间(Tmmax)为0.5 h,达峰浓度(Cmax)为68.88 ng/mL,0-24 h的平均药时曲线下面积(AUC0-24h)为307.23 ng·h/mL,按AUC0-24h估算的平均生物利用度(F0-24h)为16.97%。单剂量静脉注射组的平均消除半衰期(T1/2)为46.32 h,平均滞留时间(MRT)为3.31 h,平均血浆清除率(CL)为0.58 1/(kg·h),平均表观分布容积(Vd)为35.52 L/kg。结果表明,口服海南霉素钠预混剂吸收迅速,但吸收不完全;进入鸡体内后海南霉素分布广泛,消除缓慢,半衰期长。