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本研究采用粗木聚糖半纤维素为唯一碳源制作初筛培养基,以透明圈直径和透明度为指标的筛选方法,从牛、羊瘤胃内容物、收获后玉米地秸秆周围的土壤、奶牛场牛粪等样品中分离得到61株产生明显透明圈的芽孢杆菌菌株;再通过摇瓶发酵,DNS法检测酶活的复筛方法得到两株高产木聚糖酶的芽孢杆菌菌株L2-19和Y25。经形态、培养特征鉴别和生化鉴定,两株菌分别为短小芽孢杆菌(B.pumilus)和枯草芽孢杆菌(B.sublitis)。 基于对木聚糖酶研究的需要,探讨了从玉米芯中提取木聚糖的工艺条件。综合蒸煮法及碱提取法的优点,采用先蒸煮、后碱提取、再用酒精沉淀的方法,得到半纤维素含量为63.4%,提取率为27.6%的粗木聚糖产品。 菌株摇瓶发酵产酶条件的优化试验表明:L2-19菌株以麸皮为最佳碳源,酵母膏为最佳氮源;Y25菌株以麸皮为最佳碳源,(NH4)2SO4为最佳氮源。这两株菌的摇瓶发酵培养基最适初始pH值为6.0,在pH值为7.0时仍能分别达到最大酶活的98.2%和97.5%。L2-19和Y25菌株产酶活力随着装液量的增多而降低。 木聚糖酶粗酶液的基本性质为:L2-19酶液的最适反应温度为50℃、最适反应pH为7.0,酶液在pH6.0时稳定性最好,但在pH4.0-10.0范围内相对酶活均在75%以上:Y25酶液的最适反应温度为50℃、最适反应pH为6.0,酶液在pH6.0时稳定性最好,但在pH5.0-9.0范围内相对酶活保持在接近75%或以上,说明L2-19和Y25菌株所产酶都能在较大pH范围内保持稳定。L2-19和Y25在40℃以下热稳定性好。 木聚糖酶的SDS-PAGE电泳和活性染色试验表明:对L2-19菌株发酵液取50%(NH4)2SO4饱和度以下的盐析蛋白电泳分析,有5条酶带,分别为11.5KD、15.4KD、17.8KD、20.9KD、32.8KD,活性染色证明其中17.8KD、20.9KD和32.8KD三条酶带具有木聚糖酶活性;对Y25取60%(NH4)2SO4饱和度以下的盐析蛋白电泳分析,有6条酶带,分别为11.5KD、12.4KD、19.7KD、27.2KD、43.OKD、46.8KD,活性染色证明其中19.7KD和27.2KD两条酶带具有木聚糖酶活性。 安全性试验以小白鼠为实验动物,通过经口灌胃和腹腔注射两个途径对L2-19和Y25菌株进行急性毒性试验。灌胃组和注射组均健康存活,体重增加,与对照组相比差异性不显著,证明L2-19和Y25菌株对小白鼠安全无毒。