小麦与叶锈菌互作前后的MSAP分析

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:kensy
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内源DNA的甲基化是真核生物的表观遗传调控的重要组成部分,在真核生物的基因表达调控中具有重要的作用。生物胁迫会为植物提供一种内在的表观遗传进化动力。研究特定条件下DNA甲基化的变异模式有助于我们全面的理解DNA甲基化的表观调控生物学功能。小麦近等基因系TcLr19、TcLr41在苗期对叶锈菌生理小种THTT、TKTJ分别表现为小种特异性抗病反应,及其感病亲本Thatcher在苗期对叶锈菌生理小种THTT、TKTJ分别表现为感病反应,是研究生物胁迫的独特材料。本研究首次使用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术分析了两种小麦材料甲基化水平,同时比较了它们苗期接菌前后基因组DNA胞嘧啶甲基化模式。结果60对选扩引物对接种前后的小麦DNA进行全基因组筛选,共得到3554个片段。其中有998个片段是两种甲基化模式中的一种,小麦近等基因系TcLr19及其感病亲本Thatcher这两种小麦材料的甲基化水平约为28.1%。在所有的引物中,并没有直接分离得到接菌前后的甲基化模式的差异。为了进一步验证上面的结果,我们从60对引物中选择了效果较好的12引物再次对小麦抗叶锈病近等基因系TcLr41和感病对照Thatcher接菌前后的基因组DNA进行MSAP分析,总计扫描了934个基因位点。至少存在239个两种甲基化情况中的一种,在两种酶切条件下可扩增不同的片段。其中检测到全甲基化位点148个,占全部检测位点的15.8%;半甲基化位点91个,占全部检测位点的9.7%,总甲基化率约为25.5%。无论在亲和互作还是在非亲和互作中,并没能检测到稳定的接菌前后的差异,不过获得了与接菌无关的TcLr41与其感病亲本Thatcher之间的表观遗传学差异,即二者都可以被EcoR I-Hpa II组合酶切,但EcoR I - Msp I组合可以酶切Thatcher的基因组,不可以酶切TcLr41的基因组。这意味着这一位点在Thatcher中为未被甲基化,在TcLr41中为半甲基化状态。但是该位点的甲基化程度不受病原菌侵染的影响。同时,在接菌前后相同遗传背景材料中获得了多个甲基化位点的差异,多达21条引物能检出这种多态性差异,差异的检出率高达为35%。但是这种甲基化差异在随后的三次生物学重复中,并不能被很好的重复。因此,不能把这种差异认为是一种可靠的受接菌诱导的结果。这一现象的存在,在众多其他作物的MSAP分析中并没有被报道。为了进一步了解甲基化与抗病的关系,对小麦中和甲基化相关的MET1基因片段的分离及Blastn分析,结果表明,它与水稻的甲基化转移酶有高达87%的同源性。试验中使用了三个小麦材料以及多达60对的MSAP引物,从整个基因组的角度全面了解经生物胁迫处理的小麦的表观遗传稳定性。证实,叶锈菌的胁迫并没有诱导大规模的稳定的或者特异位点的甲基化变化,证实了小麦抗叶锈近等基因系之间存在表观遗传差异。
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