[背 景]目前,我国胃癌五年生存率较低,主要原因是多数胃癌患者确诊时即为晚期、且临床化疗容易出现耐药。肿瘤化疗耐药显著影响着患者的生存期,因此,有关化疗及化疗耐药机制的研究正在不断探索中。一些研究表明,代谢重新编程是癌症的标志之一,且其在化疗及化疗耐药过程中也扮演着重要角色。其中,在化疗药物的作用下,肿瘤细胞可呈现氧化应激状态,可产生活性氧分子,其所造成的氧化损伤是化疗药物致癌细胞死亡的重要事件。然而,活性氧分子(ROS)在胃癌化疗过程中的作用和其具体的作用机制尚不清楚。活性氧分子在化疗期间的变化是否与胃癌化疗的效果呈相关性,尚未阐明。另外,也有部分试验及研究结果表明,不同种类的化疗药物作用于癌细胞后产生的活性氧分子参与相应癌种化疗耐药的形成。然而,活性氧分子如何参与调节胃癌化疗耐药,其具体作用机制仍然不明确。[目 的]本研究采用病理免疫组化、MTT、Western-blot等技术检测不同分期的胃腺癌组织中诱导性一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)和核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的表达状态;以及 H2O2、顺铂、H2O2+顺铂干预胃癌MKN-45细胞后iNOS和NF-κB的表达状态。探索氧化应激和顺铂化疗对胃癌iNOS表达的影响,及其相互作用,并通过体外细胞试验来探索相关机制,以揭示iNOS在化疗和化疗耐药中的作用,可望为扭转进展期胃癌化疗耐药事件提供新靶点,以提高晚期或难治性胃腺癌治疗效果。[方法]1、临床上收集78例来自胃腺癌患者的癌组织标本,并收集其分期、病理结果、化疗方案等相关临床资料。2、通过病理免疫组化分析新辅助化疗+手术组及单纯手术组、早期及进展期组胃腺癌组织iNOS蛋白表达情况。3、使用卡方检验分析新辅助化疗+手术组及单纯手术组、早期及进展期组胃腺癌组织中iNOS蛋白阳性表达率。4、用体外细胞培养方法培养足够数量的MKN-45人胃癌细胞,将其传代为等细胞数量的4组后继续培养,培养至所需目标数量后,实验组分别给予H202、顺铂、顺铂+H2O2处理,对照组用等体积的相同的完全培养液培养。5、用MTT实验法检测不同浓度的H2O2、顺铂、顺铂+H2O2分别作用于MKN-45细胞后的最适宜作用浓度,计算IC50值,并检测最佳作用时间。6、用Western blot法检测t-BHP、顺铂、顺铂+t-BHP及对照组胃癌细胞中iNOS蛋白表达情况,用Quantity one软件(Bio-Rad)分析iNOS和NF-κB蛋白的灰度值,并与内参蛋白β-actin相比较,计算出iNOS及NF-κB蛋白的表达量,并进行两两比较。[结 果]1、病理免疫组化检测结果显示直接行胃癌根治术的进展期胃癌患者癌组织中iNOS表达明显高于早期患者,差异显著(P<0.05)。2、病理免疫组化结果显示,对于进展期患者,直接手术组胃癌患者癌组织中iNOS表达明显高于新辅助化疗+手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。3、MTT检测结果显示:与单纯H2O2组相比,H2O2+CDDP组在等量的CDDP的培养孔中,依次加入不同浓度的H2O2,其对MKN-45细胞的抑制率显著提高。其中,0.0001%H2O2+CDDP较单用0.0001%H202抑制率从38.69%提升至 69.24%,提升约 2 倍。H2O2+CDDP 组的 IC50=1.523e-006(8.192e-007to 2.833e-006)。H2O2+CDDP组的IC50明显比H2O2组的IC50低,差异显著(P<0.001)。在 0.60ug/ml的 CDDP 中,加入 1.523e-006%的 H202,即可对胃癌MKN-45细胞达到50%的抑制率。4、Western-blot检测显示CDDP组iNOS的表达明显下降;H2O2组与CDDP组比较,iNOS蛋白表达差异显著(P=0.007);与CDDP处理胃癌细胞组相比,H2O2+CDDP干预组iNOS蛋白的表达量明显上升,两组之间差异显著(P=0.0138)。5、Western-blot检测显示CDDP组NF-κB表达明显下降;H2O2组与CDDP组比较,NF-κB蛋白表达差异显著(P=0.013);与CDDP处理胃癌细胞组相比,H2O2+CDDP干预组NF-κB蛋白的表达量明显上升,两组之间有明显的差异(P=0.027)。[结论]H2O2促发的氧化应激明显提高了胃癌iNOS和NF-κB表达。而顺铂化疗则下调了胃癌iNOS与NF-κB蛋白的表达,在减轻胃癌病灶炎症状态的同时却诱导了耐药发生。H202可诱导肿瘤细胞内的氧化应激状态,通过增加iNOS蛋白的表达,以提高胃癌细胞对顺铂的敏感性,实现耐药逆转,研究结果有望为难治性胃癌提供新的治疗策略。