对鸡的基因组操作为生产药用和工业用蛋白提供了一个强大的生物反应器。产蛋鸡因为能在鸡蛋中表达特异蛋白而被认为是生产药用蛋白的首选生物反应器。鸡卵清蛋白启动子是主要的强组织特异性的启动子之一,50%以上的鸡蛋蛋白成分的都是由该启动子控制产生。在本研究的第一部分,我们构建了输卵管特异性的载体(pL-2.8OVtPAGFP)表达tpa蛋白,并检测了该载体在产蛋鸡和鸡蛋中的表达情况。在体外研究试验中,我们用pL-2.8OVtPAGFP和pEGP-N1(对照)质粒分别转染了鸡输卵管上皮细胞,HeLa细胞,C127细胞和293FT细胞。结果发现,pL-2.8OVtPAGFP只在鸡输卵管上皮细胞中表达,而不会在HeLa细胞,C127细胞和293FT细胞表达。作为对照的pEGP-N1在这四种细胞中都表达了。对于体内研究,我们注射了pL-2.8OVtPAGFP到产蛋鸡翅静脉,结果发现收集的鸡蛋及鸡的组织中都有tPA表达。通过westernblot,我们在处理组鸡蛋和输卵管上皮细胞都检测到了一条89kDa带,说明tPA在蛋清和输卵管上皮细胞中都表达了。tPA的纤维溶解作用在蛋清和输卵管细胞蛋白展现出暗的区域围绕样品,证明了tPA的活性。GFP只在注射鸡的输卵管组织中观察到了,但在心、肌肉、肝和小肠中都没有。用pL-2.8OVtPAGFP生产病毒然后注射到50个受精蛋中发现分析孵出的小鸡是否有tPA表达。最后得到了11只小鸡,其中只有4只(雌雄各两只)经过PCR鉴定携带外源基因(36%)。用G0代公鸡跟野生型母鸡交配,收集产下的鸡蛋,孵化得到G1代鸡。在G1代中只有4只小鸡经检测为阳性个体(携带tPAGFP)。孵出的小鸡只有在输卵管组织中有GFP,在睾丸和其他组织中没有发现。本研究首次成功地证明输卵管特异性的载体可以在体内和体外表达组织血纤维蛋白酶原激活蛋白,在输卵管上皮细胞,蛋清和注射母鸡的组织当中均有tPA表达。而且我们发现通过慢病毒注射受精蛋,可以使重组的人组织血纤维蛋白酶原激活蛋白在G0代和G1代中表达。小结：进一步的改进输卵管特异性载体,可以通过产蛋鸡生产相对高水平而且可靠的重组tPA。在第二部分中,我们研究了在产蛋鸡中输卵管特异性地表达人重组leptin。构建了pL-OV-Leptin载体并生产相应的病毒,然后注射到受精蛋中。G0代获得了7只小鸡。PCR鉴定显示,所有的小鸡都携带外源基因leptin。这些G0代鸡正在饲养中,将用于与野生母鸡交配,获得的F1、F2代将用于分析转基因的沉默情况并分析产的鸡蛋中leptin水平。.最后,本文首次报道了在产蛋鸡中表达重组的人leptin。在第三部分,我们在永生化的输卵管上皮细胞上研究了第一个内含子对卵清蛋白启动子活性的影响。输卵管上皮细胞用pL-CTAGNEO慢病毒感染并获得永生化。The pL-CTAGNEO病毒可以维持输卵管上皮细胞的结构完整和生长18天,而对照组的细胞随着其老化和死亡,在7-10天后生长率持续下降。永生化的输卵管上皮细胞分别用pL-OV1345tPAGFP和pL-OV2964tPAGFP病毒感染。发现OV1345病毒处理组的DNA和mRNA的量分别是OV2964病毒处理组的46倍和14倍。OV2964病毒的转录效果比OV1345病毒高出3倍。这一结果表明,可以用pL-CTAGNEO病毒建立鸡的输卵管上皮细胞系并用作一个持续稳定的体外系统研究输卵管上皮细胞。同时发现,OV基因的第一内含子对转录有顺式调节作用。在第四部分中,我们研究了鸡蛋打孔和封口的新方法并分析了五个不同组的孵化率。总共250个受精蛋,按A,B,C,D和E平均分成了5各组,每组50个蛋。前三组分别注射5μl的pL-2964OVtPAGFP, pL-OVtPA和DMEM,D组只开一个孔,E组作为对照。结果：A,B,C,D和E组的孵化率分别是10%,18%,24%,46%,和94%,死胚率分别是14%,26%,34%,26%和0.02%,无胚蛋的比例分别是76%,56%,42%,28%和0.06%。我们还发现,五个组的鸡蛋中,胚胎发育十天前死亡率分别是57.1%,38.5%,29.4%和0.15%,10天后死亡率分别是42.9%,61.5%,70.6%,84.8%和1%。死胚和活胚的比例是24%,44%,58%,76%和96%,而无胚蛋的比例分别是76%,56%,42%,28%和0.06%。D组的孵化率最高,而A,B,C三组孵化率较低,可能是因为注射部分太深或有气泡注入。孵化10天内死亡的胚胎数在A,B,C组更多,而孵化10天后的死亡率在各实验组都达到了最大,说明不适当的打孔或任何严重的污染都会造成胚胎发育10天后的死亡。进一步的研究有待开展分析注射组低孵化率的原因。通过后续研究,我们可以改善这种方法,用于有效生产体细胞和生殖细胞嵌合的鸡和转基因禽类。