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研究背景与目的过敏性哮喘在近几年发病率有增高趋势。研究显示,过敏性哮喘是由多种细胞及细胞因子参与的一种顽固性慢性呼吸道疾病,以气道高反应性和气道重构为主要特征,气道炎症是过敏性哮喘的基本病理改变。气道炎症表现为炎性细胞在气道浸润聚集,炎性细胞包括淋巴细胞、嗜酸性细胞、中性粒细胞、内皮细胞及巨噬细胞等,此外还有多种细胞因子及炎性介质。大量文献表明免疫细胞及其产生的细胞因子在哮喘的发病过程中发挥着重要作用,其中以CD4+T细胞亚群(Th1、Th2、Th17和调节性CD4+T细胞)比例的改变和IL-5、IL-10、IL-17等细胞因子的变化尤为突出。IL-10通过对炎症细胞活化、增殖和细胞因子分泌的直接抑制作用,抑制T细胞应答和特异性IgE分泌,而抑制气道炎症,最终起到抑制过敏性哮喘的作用。Th17的主要作用与炎症相关,Th17通过分泌炎症性细胞因子IL-17而发挥作用。IL-17引起中性粒细胞的聚集和集落刺激因子的分泌,又可以促进生成粒细胞,与一些自身免疫性疾病及炎症反应的发作与其有密切关系。近年来一个研究热点的是Th17细胞及IL-17因子与慢性炎症疾病及自身免疫性疾病的关系。研究表明,中性粒细胞数量及血清IL-17水平与过敏性哮喘患者及重症患者的炎症严重程度成正相关,可能患者的气道高反应也与之有关。临床上使用糖皮质激素治疗时可以明显减轻患者的气道炎症。IL-17导致气道局部炎症持久存在或范围扩大是过敏性哮喘的发病机制中的关键因素。为进一步探讨过敏性哮喘气道炎性细胞浸润与疾病发生发展的关系,本课题以临床过敏性哮喘患者为研究对象,收集肺泡灌洗液(BALF)并对其进行细胞计数及分类,使用流式细胞仪对外周血中单个核细胞(PBMC)的Th1、Th2及Th17细胞进行检测,使用酶联免疫和荧光定量PCR对外周血中的IL-10及IL-17水平和PBMC中的IL-10 mRNA以及IL-17 mRNA水平进行检测。研究过敏性哮喘患者气道炎性细胞浸润后IL-10及IL-17的变化,为过敏性哮喘临床的诊断治疗提供依据。方法1.研究对象:分为两组。哮喘组哮喘组为记录完整的未经过规范化治疗的30例过敏性哮喘患者,对照组为年龄相仿的正常健康志愿者30例。2.肺泡灌洗液中炎症细胞检测:收集肺泡灌洗液,离心,取沉渣进行细胞计数及白细胞分类。3.肺泡灌洗液上清IgE水平检测:收集肺泡灌洗液,离心,取上请,使用ELISA法检测IgE水平。4.血清IL-10、IL-17水平检测:抽取外周血,分离血清,使用ELISA法对IL-10及IL-17水平进行测定。5.外周血PBMC中的IL-10及IL-17 mRNA检测:抽取外周血,分离单个核细胞(PBMC),提取RNA,使用PCR荧光定量对IL-10及IL-17 mRNA进行测定。6.外周血PBMC Th1、Th2及Th17细胞亚群测定:使用流式细胞仪分析外周血PBMC中的Th1、Th2及Th17细胞亚群。结果1.哮喘组BALF中细胞总数46.45±4.07较对照组0.95±0.89多,淋巴细胞百分比(78.05±4.39)%明显高于对照组(0.20±0.52)%,嗜酸性粒细胞百分比(19.75±3.20)%明显高于对照组(0.10±0.22)%,且两组之间都具有统计学意义。2.哮喘组BALF中IgE水平7.56±2.01明显高于对照组2.68±1.32,两组差异具有统计学意义。3.哮喘组血清IL-10水平8.64±0.98与对照组25.05±1.29相比有所下降,而哮喘组血清IL-17水平7.67±2.35显著高于与对照组2.97±1.40。哮喘组外周血PBMC中的IL-10 mRNA水平0.384±0.459与对照组0.876±0.512相比有所下降,哮喘组外周血PBMC中的IL-17 mRNA水平0.674±0.481显着升高与对照组0.289±0.265,哮喘组与对照组相比都有统计学意义。4.哮喘组外周血PBMC中的CD4+IL-4+细胞水平10.79±2.16与对照组4.11±1.03相比明显升高,同时CD4+IL-17A+细胞水平3.94±0.59与对照组1.13±0.59相比明显升高,而CD4+IFN-γ+细胞水平2.68±1.32与对照组13.57±3.56比较明显的降低,两者相比都具有统计学意义。结论过敏性哮喘气道炎性细胞浸润伴随肺泡灌洗液炎性细胞增加、IgE水平增高和Th2、Th17细胞增加,因此,IL-10和IL-17是检测过敏性哮喘疾病进展的指标,并与气道炎症的发生机制相关。