LSV感染百合生理生化检测及病理学观察

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wonkyman2
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百合无症病毒(LSV)是导致百合种球退化的主要病毒,给百合种植业带来严重的危害,目前根治该病毒已成为科学工作者急待解决的课题。本研究从分离提纯染病百合植株中LSV入手,用该病毒侵染百合无毒苗,通过检测受LSV侵染后寄主植物的生理生化指标的变化和电镜观察感病寄主细胞超微结构病变来阐明该病毒的致病机理,为百合的抗病性育种提供依据。以东方百合‘西伯利亚’和‘索邦’感病植株为试材,通过二次PEG沉淀法和蔗糖密度梯度提纯法对LSV进行分离提纯。实验结果表明:蔗糖密度梯度提纯法对LSV的提纯效果较好,得到完整且数量多的LSV粒子,病毒的紫外吸收高峰为270nm,OD=1.714,最低吸收峰为240nm,OD=0.921,OD260与OD280的比值为1.323。病毒浓度为0.328mg/mL,产量为1.453mg/100g。LSV分别侵染西伯利亚和索邦,通过测定叶绿素含量、光合速率以及SOD、POD、PPO以及PAL活性,明确该病毒侵染百合生理生化变化规律。实验结果表明:LSV侵染百合后,叶绿素a,叶绿素b和总叶绿素含量与健康对照植株相比有不同程度的减少,西伯利亚分别是28.6%、33.3%和23.5%,索邦分别是10%、12.5%和11.7%。百合的Pn、Gs和Ci受LSV侵染后,相较于健康对照都降低,西伯利亚分别降低33.3%、25%和13.8%,索邦分别降低15.3%、18.5%和7.1%。抗氧化酶系统呈现规律性反应,即SOD活性比健康对照明显上升,西伯利亚和索邦分别增加了23.3%和11.7%;西伯利亚POD活性比健康对照增长了29.4%,索邦增长了10.3%;PPO活性在接种前期比对照分别增长了16.7%和9.2%;PAL活性高峰值比健康对照分别增长了42.5%和26.6%,表现为原有正常代谢发生紊乱,次生代谢系统作用增强。透射电镜观察感染LSV和LMoV的寄主细胞的超微结构,结果显示:在LSV侵染的植株中,叶绿体的病变表现为:几乎所有叶绿体片层结构发育受阻,片层结构疏松且叶绿体膨胀变圆,畸形;大部分叶绿体中淀粉粒膨胀,增多,严重时叶绿体外膜消解。在LMoV侵染的植株中,叶绿体的病变表现为:几乎所有叶绿体片层结构发育受阻,片层结构疏松,散乱,且叶绿体畸形,还有部分叶绿体膨胀变圆;大部分叶绿体中淀粉粒增多,还有一些叶绿体中淀粉粒膨大,并占据整个叶绿体,部分叶绿体膜局部受损。被两种病毒侵染的植株细胞内线粒体数目较正常对照都增多。
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