重金属汞的单克隆抗体制备及酶联免疫法的建立

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本论文用6-巯基烟酸作为螯合剂成功合成了 Hg-MNA-BSA,并制备了汞单克隆抗体,建立了间接酶联免疫法用于检测自来水和湖水中的重金属汞。用6-巯基烟酸作为双功能螯合剂,牛血清蛋白(BSA)作为载体蛋白,用碳二亚胺法制备了汞免疫原Hg-MNA-BSA。经过紫外分光光谱法和SDS-PAGE电泳对完全抗原的定性表征以及ICP-MS的定量表征得到了 13:1的偶联率的汞完全抗原;利用免疫抗原对五只小鼠进行五次免疫后,筛选出2号和5号两只小鼠进行冲刺免疫;用聚乙二醇法进行细胞融合,经过三次亚克隆最终筛选得到了一株能够稳定分泌汞单克隆抗体的杂交瘤细胞株4B12;对该细胞株进行体内培养之后,最终获得大量抗体经纯化后保存。用试剂盒对抗体鉴定得到其亚型为IgG1型;计算亲和力常数为5.109×107L/mol,属于高亲和力抗体;与金属离子测交叉率得到Au+和Cu2+的交叉率分别为3.36%和0.84%,其余的金属离子Cr3+、Cr6+、Mg2+、Ni+、Fe2+、Co2+、Mn2+、Zn2+、As3+、Ca2+、Sn2+、Cd2+、Pb2+、Ba2+、Al3+和 Sr2+的交叉率均低于0.84%。研究发现4B12细胞株分泌的抗汞的单克隆抗体不经螯合剂即可识别Hg2+,以此为基础建立了 ic-ELISA法,并对包被液、封闭液、抗体稀释液和标准品稀释液进行优化,得到优化后的方法对汞的半数抑制率(IC50)为1.68 ng/mL,对甲基汞的半数抑制率(IC50)12-8 ng/mL,对汞的检出限为0.079 ng/mL以及检出范围(IC20-IC80)为0.22-12.67 ng/mL。将建立的ic-ELISA法用于阴性加标湖水和自来水的检测,阴性加标样品的回收率为91%-116%,变异系数为5.6%-16.6%。与ICP-MS的对比,确定优化后的ic-ELISA可以用于实际样品的检测。
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