目的本研究通过质粒转染技术调控BAG3蛋白在结肠癌HCT116和RKO细胞系中的表达,进而探究调控BAG3蛋白表达后对5-fu药物敏感性的影响,旨在明确BAG3蛋白在结肠癌发生发展中的作用,为结肠癌的多重耐药寻找新的药物靶点。方法1、体外培养结肠癌HCT116和RKO细胞系,通过将外源pcDNA3-N-EGFP BAG3(WT)瞬时转染到上述两种结肠癌细胞系中使BAG3蛋白过表达;将shBAG3转染到上述两种结肠癌细胞系中使BAG3沉默。通过q-PCR和Western blot实验方法从mRNA和蛋白水平验证BAG3蛋白过表达与沉默细胞模型是否构建成功。2、采用MTT法检测细胞增殖;坐标定点划痕修复实验和transwell转移小室实验检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡等实验方法,来研究结肠癌细胞过表达BAG3或者敲除BAG3后对5-fu(5-氟尿嘧啶)药物敏感性的影响。结果1、经q-PCR和Western blot检测发现,结肠癌细胞HCT-116和RKO转染外源pcDNA3-N-EGFP BAG3(WT)后,与对照组(转染pcDNA3-N-EGFP空质粒)相比,BAG3在RNA水平和蛋白水平表达均增强,差异显著;结肠癌细胞HCT-116和RKO转染不同敲低位点的shBAG3,发现其中shBAG3-1334与对照组(转染shNC)相比,BAG3蛋白敲低效果最佳,细胞模型构建成功,用于后续实验。2、在5-fu不同药物浓度作用下,过表达BAG3使结肠癌细胞的细胞活力、迁移和侵袭能力均提高,凋亡细胞数量减少。说明过表达BAG3促进了结肠癌细胞对5-fu的抗性,抑制了结肠癌细胞凋亡,增强了结肠癌细胞对5-fu的耐药性。3、在5-fu不同药物浓度作用下,敲低BAG3后细胞活力、迁移能力、侵袭能力均降低,凋亡细胞增加。说明敲低BAG3促进了结肠癌细胞的凋亡,增强了结肠癌细胞对5-fu的药物敏感性。结论BAG3过表达促进了结肠癌细胞对5-fu的耐药性,敲低BAG3增强了结肠癌细胞对5-fu的药物敏感性,BAG3可能作为解决结肠癌化疗耐药的新的生物学靶点。