第一部分 MCP-1对骨癌痛大鼠机械痛阈值和JAK2-STAT3信号通路及相关蛋白的影响　　目的：　　蛛网膜下腔内注射单核细胞趋化蛋白1的中和抗体，研究 MCP-1在大鼠胫骨癌痛中的作用及其对JAK2-STAT3信号轴及相关蛋白表达的影响。　　方法：　　取60只成年的、身体条件良好的♀SD大鼠。依照随机号码表法分为四组：假手术对照组（S组，n=19）、胫骨癌痛模型组（B组，n=19）、胫骨癌痛模型+PBS溶剂组（ BP组， n=11）、胫骨癌痛模型+MCP-1中和抗体组（ BM组， n=11）。B组、BP组、BM组大鼠于左侧后肢胫骨骨骺内侧部位分别植入乳腺肿瘤细胞10μl来制作实验组动物模型。S组大鼠在左后肢相同部位注入Hank’s液10μl，造模的同时将BP组、BM组大鼠于腰3-4间隙行鞘内置管术。造模成功后9～11d， BP组SD大鼠鞘内注射PBS10μl/次，1d/次，连续3天；BM组SD大鼠蛛网膜下腔内注射MCP-1中和抗体（100ng/ml）10μl/d，1次/d，连续3天。于造模前(TBL)、造模后9d给药前(T0)、11d给药后1h(T1)、11 d给药后2h(T2)、11d给药后3h(T3)、11d给药后4h(T4)、11d给药后24h(T5)时测定机械痛阈值。测定机械痛阈后，BP组、BM组分别抽取4只大鼠，于给药后1h取腰4-6脊髓及相应节段背根神经节，使用蛋白质印迹的方法测定脊髓及背根神经节中 JAK2/STAT3信号通路相关分子蛋白表达水平的变化。B组、S组分别于造模后11d随机取4只大鼠冰上取腰4-6背根神经节及相应节段脊髓，使用蛋白质印迹的方法检测背根神经节及脊髓中 JAK2/STAT3信号通路相关分子蛋白、MCP-1和 CCR2表达水平的变化。再于第5d、17d冰上分别取B组、S组大鼠各4只，取其腰4-6脊髓及相应节段背根神经节，同样使用蛋白质印迹的方法检测大鼠MCP-1和CCR2表达水平的变化。　　结果：　　造模后第9天，与S组比较，B组、BP组、BM组大鼠左后足机械痛阈值明显下降（P＜0.01）；BM组与B组相比，鞘内注射MCP-1中和抗体后T1时大鼠机械痛阈值增高，差异具有统计学意义（P＜0.01），作用持续至T2时。　　在脊髓背角上，与 S组比较，造模后第5天，B组大鼠脊髓背角上的MCP-1表达量上调（P＜0.05）；造模后第11天和造模后第17天，分别与对应时间点的S组相比，两时间点上 B组大鼠脊髓背角上的MCP-1表达量均明显上调（P＜0.01）。B组组内不同时间点比较，随着时间的推移，脊髓背角上 MCP-1的表达量逐步上调，其中造模后第17天的大鼠脊髓背角上的MCP-1表达量比造模后第5天上调，差异具有统计学意义（P＜0.01），造模后第17天比第11天脊髓背角上的MCP-1表达量上调，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　在脊髓背角上，与各个时间点的S组相比，在造模后第5天、第11天和第17天三个时间点上，B组三个时间点大鼠的CCR2表达量均上调（P＜0.05），其中造模后第11天和第17天，大鼠的CCR2表达量明显上调（P＜0.01）。B组组内不同时间点比较，脊髓背角上 CCR2的表达量呈时间依赖性增加趋势，与造模后第5天相比，造模后第17天的大鼠的CCR2表达量显著上调（P＜0.01）；造模后第17天比第11天脊髓背角上的CCR2的表达量上调，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　在背根神经节上，造模后第5天、第11天和第17天，三个时间点上，与对应的S组相比，B组大鼠的MCP-1表达量均有上调（P＜0.05）。B组组内不同时间点比较，与造模后第5天相比，造模后第17天大鼠背根神经节上的MCP-1表达量显著上调（P＜0.05），造模后第17天比第11天脊髓背角上的MCP-1的表达量上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　在背根神经节上，与相应时间点的S组相比，B组大鼠的CCR2表达量均显著上调（P＜0.01）。B组组内不同时间点比较，CCR2的表达有随时间推移逐渐上升的趋势，与造模后第5天相比，造模后第11天大鼠背根神经节上的CCR2表达量上调（P＜0.05），造模后第17天比第5天脊髓背角上的CCR2的表达量显著上调，差异有统计学意义（P＜0.01）。　　造模后第11天，在脊髓背角上，与 S组比较， B组、BP组 p-JAK2、p-STAT3、TRPV1的表达量均显著上调（P＜0.01）；与 B组相比，BM组脊髓背角上p-JAK2、p-STAT3、TRPV1的表达量均明显下调（P＜0.01）。在背根神经节上，与S组相比，B组和BP组的p-JAK2、p-STAT3、TRPV1表达量均上调（P＜0.01）。与B组相比，BM组背根神经节上 p-JAK2、p-STAT3、TRPV1的表达量均明显下调（P＜0.01）。　　结论：　　骨癌痛时，大鼠脊髓背角和背根神经节上 MCP-1和 CCR2的表达均有增加。鞘内注射 MCP-1中和抗体可缓解胫骨癌痛大鼠的痛觉过敏，机制可能与其对大鼠脊髓及背根神经节的STAT3磷酸化程度的影响相关。　　第二部分 AG490对骨癌痛大鼠机械痛阈值及TRPV1表达的影响　　目的：　　观察鞘内注射 AG490（JAK2抑制剂）对骨癌痛大鼠痛阈值及其脊髓背角和背根神经节中TRPV1表达的影响，探讨JAK2/STAT3信号轴在骨癌痛发病机理中的作用。　　方法：　　取成年健康雌性SD大鼠44只。依照随机号码表法平均分为四组：假手术对照组(S组，n=11)、胫骨癌痛模型组（B组，n=11）、胫骨癌痛模型+DMSO溶剂组（BD组，n=11）、胫骨癌痛模型+AG490组（BA组，n=11）。S组：实验动物左侧胫骨骨骺的后内侧植入10μl Hank’s液。B组：同样的部位植入肿瘤细胞悬液10μl。BD组：左胫骨骨骺端植入肿瘤细胞悬液10μl。模型制作完成的第9-11天，蛛网膜下腔内注射5％二甲基亚砜（DMSO）溶剂10μl，每日一次，连续3天。BM组：左胫骨骨骺端腔内植入乳腺肿瘤细胞悬液10μl。模型制备成功的第9-11天，蛛网膜下腔内注射 AG490(1mmol/l)10μl，每日一次，连续3天。建造胫骨癌痛模型的同时各组大鼠均行腰3-4间隙鞘内置管术。于造模前(TBL)、造模后第9 d给药前(T0)、第11 d给药后1h(T1)、第11 d给药后2h(T2)、第11 d给药后3h(T3)、第11 d给药后4h(T4)、第11 d给药后24h(T5)测试大鼠左后足机械痛阈值，每组另取4只SD大鼠于给药后2h取腰4-6脊髓左侧脊髓背角及同节段背根神经节，采用免疫印迹的方法检测脊髓背角及背根神经节上TRPV1的表达。　　结果：　　与 S组比较，B组、BD组、T0-5时机械痛阈值降低(P＜0.01)，背根神经节和脊髓背角上的TRPV1表达上调(P＜0.01)。与 B组比较，BD组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05)；BA组T2时机械痛阈升高，作用持续至给药后3h，背根神经节和脊髓背角TRPV1表达下调(P＜0.01)。　　结论：　　蛛网膜下腔内注射 JAK2抑制剂可缓解胫骨癌痛大鼠的痛觉过敏，TRPV1的表达也相应降低，JAK2/STAT3信号转导通路参与调节大鼠骨癌疼痛痛觉过敏可能与TRPV1受体相关。