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目的:三叶因子家族3（Trefoil factor family,TFF3）对嗜酸性粒细胞浸润型鼻窦炎（eosinophilic chronic rhinosinustis,e CRS）鼻黏膜上皮中紧密连接蛋白（tight junctions,TJs）的影响及机制研究。方法:1、在鼻黏膜中,使用免疫组化（IHC）检测TFFs（TFF1、TFF2和TFF3）和TJs（occludin、claudin-1和ZO-1）的定位和表达强度,实时荧光定量PCR（RT-q PCR）及免疫印迹（WB）检测TFFs和TJs的m RNA和蛋白的表达。2、取人鼻黏膜进行鼻黏膜上皮细胞（Human nasal epithelial cells,HNECs）原代培养,用Th2型细胞因子IL-13刺激,建立HNECs的TJs损伤细胞模型（以下简称TJs损伤模型）,确定最佳造模浓度及时间。3、单独或联合使用TFF3和PI3K特异性抑制剂（LY294002）作用于HNECs或TJs损伤模型,RT-q PCR和WB检测TFF3对TJs及PI3K/Akt通路蛋白的影响。结果:1、组织实验:IHC结果显示,e CRS组鼻黏膜中TFF1和TFF3表达均较对照（NC）组和Non-e CRS组明显升高,有统计学差异（p均＜0.05）,主要表达于杯状细胞;未检测到TFF2在鼻黏膜上皮组织表达;e CRS组鼻黏膜occludin、claudin-1、ZO-1表达均低于NC组,有统计学差异（occludin p=0.019,claudin-1p=0.002,ZO-1 p=0.001）,与Non-e CRS组相比无明显差异。WB结果显示,e CRS鼻黏膜组织中TFF1和TFF3的蛋白（p均＜0.001）表达均高于NC组,有统计学差异;TFF2的蛋白与NC组相比无统计学差异（p=0.303）;occludin、claudin-1、ZO-1蛋白表达均低于NC组,有统计学差异（occludin p=0.002,claudin-1 p＜0.001,ZO-1 p＜0.001）。RT-q PCR结果显示,e CRS鼻黏膜组织中TFF1和TFF3的m RNA表达均高于NC组,有统计学差异（TFF1 p=0.003,TFF3 p＜0.001）。TFF2的m RNA与NC组相比无统计学差异（p=0.055）;occludin、claudin-1、ZO-1的m RNA表达均低于NC组,有统计学差异（occludin p=0.007,claudin-1 p＜0.001,ZO-1 p＜0.001）。对e CRS鼻黏膜组织中TFF3和TJs的m RNA行Pearson相关性分析,TFF3和TJs呈中度正相关,差异有统计学意义（occludin p=0.007,r=0.661;claudin-1 p=0.002,r=0.614;ZO-1 p=0.003,r=0.548）;TFF1和TJs呈低度正相关,差异有统计学意义（occludin p=0.040,r=0.467;claudin-1 p=0.012,r=0.362;ZO-1 p=0.025,r=0.425）。2、细胞模型建立:IL-13诱导HNECs的TJs损伤模型,与正常HNECs相比,occludin、claudin-1、ZO-1 m RNA表达降低,有统计学差异（occludin p=0.010,claudin-1 p=0.004,ZO-1 p=0.004）;同时,TFF3较正常HNECs的m RNA表达升高,有统计学差异（p=0.034）,TJs损伤模型建立成功。3、干预实验:与control组相比,IL-13使occludin、claudin-1、ZO-1 m RNA和蛋白表达下降,有统计学差异（p均＜0.05）;与control组相比,IL-13对p-Akt/Akt的蛋白表达差异无统计学意义。TFF3组occludin和ZO-1蛋白表达高于IL-13+TFF3组,有统计学差异（p均＜0.05）,claudin-1的m RNA和蛋白表达在两组中的表达差异没有统计学意义。在HNECs和TJs损伤模型中,TFF3处理使occludin、claudin-1、ZO-1 m RNA和蛋白表达升高,有统计学差异（p均＜0.05）;TFF3也可上调p-Akt/Akt的表达,有统计学差异（p＜0.05）。在HNECs和TJs损伤模型中,LY294002处理抑制了p-Akt/Akt的蛋白表达,同时occludin、claudin-1、ZO-1 m RNA和蛋白表达也被抑制（p均＜0.05）。在HNECs和TJs损伤模型中,TFF3+LY294002处理使p-Akt/Akt的蛋白表达降低,TFF3+LY294002处理使occludin、claudin-1、ZO-1 m RNA和蛋白表也被抑制,有统计学意义（p均＜0.05）。结论:1、TFF1和TFF3在e CRS鼻粘膜上皮中高表达,TFF2在e CRS和正常鼻黏膜上表达无差异,提示TFF1和TFF3可能参与e CRS的发病机制,而TFF2与e CRS无明显关系。e CRS鼻黏膜上皮中TJs的表达较正常鼻黏膜明显减少,提示其屏障完整性破坏。在e CRS中,TFF3和TFF1与TJs相关性均呈正相关,TFF3与TJs相关性较高。2、IL-13可以建立稳定的HNECs的TJs损伤模型。3、TFF3可通过PI3K/Akt通路上调occludin、claudin-1、ZO-1表达,对鼻黏膜上皮屏障有一定的保护作用,为e CRS的治疗提供新思路。