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多年来,禽流感病毒一直是一种极具危害性的病毒,特别是大爆发时期的高致病性禽流感病毒,不仅给畜牧业发展带来了严重的消极影响,还对人类健康造成了极大的威胁。流感病毒的流行和爆发与新产生的重组病毒有关,流感病毒可通过与另一不同亚型的病毒重配基因形成在复制效率、致病力和对宿主的适应性等方面具有优势的毒株。因此对流感病毒的基因组特性及重组机制的研究将为人们了解和预防流感提供重要的理论基础。2014年5月四川出现全球首例人感染H5N6禽流感病毒并致死的个案,该病毒由H5N1和H6N6病毒重组而来。禽流感病毒H5N1和H6N6长期存在于我国家禽市场中,这为其重组提供了条件。我们于2011年12月份在湖南岳阳家鸭中分离到一株H5N1和H6N6混合亚型毒株,该混合感染病毒中H5、H6亚型的拷贝数相当,表明病毒正处于重组的中间过程。为了解混合感染病毒中各不同亚型病毒的存在情况、各单克隆病毒基因组片段的组成情况及其生物学特性,我们以A/duck/Hunan/747/201 1(mixed)为研究对象,利用噬斑纯化实验和特异性血清中和的方法对混合亚型毒株进行分离纯化,共纯化出单克隆亚型禽流感病毒95株,其中有11株H5N1病毒,6株H6N6病毒和H5N6病毒78株,这也表明H5N6病毒具有生长优势;我们选取18株H5N6病毒、9株H5N1病毒和6株H6N6病毒共33株病毒进行全基因组测序,对单克隆病毒基因组进行分析并绘制系统进化树。结果显示27个H5之间的同源性为94.3%-100%,进化树上均属于Clade2.3.2.1,6个H6之间的同源性很高,为99.8%-100%,属于groupⅡ亚系,NA基因与HA基因情况相似;而内部基因则呈现多样性的重组现象,如18株H5N6的PB1基因有8个与H5N1病毒的PB1基因同源性很高,另10个则与H6N6病毒的PB1基因同源性很高;氨基酸序列比较发现有个别毒株出现了非常重要的氨基酸残基位点的替换或缺失。同时为了进一步研究单克隆病毒H5N6的生物学特性及重组机制,我们从33株病毒中选择了 2株H5N1病毒、2株H6N6病毒、4株H5N6病毒,加上2株混合亚型病毒和2株分别于2013年和2014年在湖南岳阳地区采集的H5N6禽流感病毒,共12株病毒,研究其在MDCK细胞和SPF鸡胚中的生长曲线和对小鼠的致病力。结果显示H5N6病毒普遍呈现生长优势;H5病毒使小鼠表现出明显的临床症状,体重丢失较多,并对小鼠呈现不同程度的致死性;而感染H6N6病毒的小鼠未出现明显的临床症状,体重丢失不明显,对小鼠没有致死性。综上所述,H5N6病毒不同的基因重组形式和基因突变使其在复制效率、生长和致病性等方面具有了优势,可更好地适应环境,将给人们在对其应对方面带来挑战。本文的研究数据将为人们防控H5N6禽流感病毒提供理论基础。