猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种急性高度接触性肠道传染疾病。自2011年以来,变异的PEDV毒株在我国大面积传播,给我国养猪业造成了巨大的经济损失,也给我国现代养猪业发展增加了许多的挑战。在临床诊断中,早期且快速准确地检测到PEDV对于预防PED的流行显得尤为重要。化学发光免疫分析方法(Chemiluminescence immunoassay,CLIA)作为一种新型的标记检测技术,其具有极高的敏感性及宽的线性范围在诊断领域被广泛使用,目前关于诊断PED的CLIA方法还未见报道。1.该研究获得了高纯度、可溶性表达N150和N蛋白。利用原核表达系统成功的表达了PEDV的结构蛋白N前150氨基酸和N蛋白,分别命名为N150和N。这两个蛋白均已可溶性的形式表达,利用亲和层析技术对以上两个蛋白进行了纯化。Western-blot结果显示,纯化后的两个蛋白都能和PEDV感染的阳性血清反应。2.建立了猪流行性腹泻病毒化学发光免疫分析方法。分别用N150蛋白和N蛋白作为包被抗原,将蛋白包被浓度包被条件、封闭条件、血清稀释度、二抗稀释度及反应时间的一系列条件进行优化后成功建立了两种检测PEDV N蛋白抗体的CLIA方法,即N150-CLIA和N-CLIA。通过检测已知PED背景的猪血清表明N150-CLIA(临界值为25434,诊断敏感性为95.2%,诊断特异性为94.1%)要略高于N-CLIA(临界值为22267,诊断的敏感性为93.0%,特异性为94.6%)。3.与进口试剂盒比较检测的符合率高,消耗时间少。通过对田间229份样品的检测表明N150-CLIA与商品化的进口ELISA试剂盒的符合率为91.7%,N-CLIA与商品化的进口ELISA试剂盒的符合率为89.1%。对两种方法的稳定性做了分析,批间和批内的变异系数均小于17%。此外,CLIA方法具有快速检测的优点,可在45min完成检测。该试验成功的表达了N150和N蛋白,并且建立能快速检测PEDV N蛋白抗体N150-CLIA和N-CLIA。