背景：热休克蛋白70（Heat shock protein70,HSP70）是在热应激和有害的理化因素作用下,细胞应激产生的一种高度保守的分子伴侣，并具有广泛的生物学功能。近年来研究表明,HSP70的生物学功能，尤其是其分子伴侣活性与肿瘤细胞耐药关系密切，因而HSP70已成为肿瘤耐药研究的一个新靶点。目的：在本文中，我们构建了一种检测热休克蛋白70分子伴侣活性的新型电化学检测方法，以实现该检测手段在复杂临床样本中的应用。方法：本工作中采用了一种HSP70的模型底物多肽作为特异性可逆识别配体，该多肽可以与HSP70结合然后在ATP水解的驱动下再可逆地与HSP70脱离。首先将多肽自组装于电极表面，经过与样品中HSP70的相互作用，界面上的一部分多肽与HSP70结合。之后用七元瓜环选择性标记未与HSP70结合的过量底物多肽；在ATP作用下，与多肽结合的HSP70催化ATP水解从而从被结合的多肽上脱离，此时再用八元瓜环将电化学信号分子标记于这些原本与HSP70结合的多肽上，从而可以定量地测定出与HSP70结合过的底物多肽和过量底物多肽的数量比，即HSP70分子伴侣活性。结果：1.在本体系中，HSP70的分子伴侣活性随浓度的增加增高，到达一定浓度后饱和；2.在胃癌7901及胃癌7901耐顺铂细胞株中，HSP70表现出了不同的分子伴侣活性，耐药细胞株中的分子伴侣活性明显高于敏感细胞株；3.晚期肿瘤耐药患者的外周血单个核细胞的胞质中可检测出高于晚期治疗有效患者的HSP70分子伴侣活性。结论：在本工作中，我们构建了一种基于靶向多肽和新型电化学标记手段的新方法，实现了对HSP70分子伴侣活性的检测，该方法实现了对肿瘤细胞的胞质提取物及恶性肿瘤病人外周血样本的成功检测。