论文部分内容阅读
第一部分DBP对SD大鼠生殖结节的发育及雄激素水平的影响目的:邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)是工农业及生活用品上的常用塑化剂,可对环境造成污染。本实验研究妊娠期暴露DBP对雄性子代生殖系统,尿道下裂发生率及雄激素水平的影响。方法:将SD大鼠孕鼠随机分为正常对照组和DBP组。怀孕13-19天,用灌胃法对DBP组孕鼠给予每天750毫克/千克体重溶于每只2ml玉米油的DBP,对照组给予相应量的玉米油作安慰剂。孕第19天,用4%水合氯醛将孕鼠麻醉后,剖宫取出胎鼠,判断性别并计数,称量体重,测量生殖结节到肛门距离(anogenital distance,AGD),生殖结节的长度及直径。对胎鼠生殖结节组织切片进行HE染色,光镜观察组织结构。将胎鼠断头取血,离心,取血清,用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)监测血清睾酮水平。结果:DBP组子代雄性胎鼠和雌性胎鼠的比例较正常对照组无明显差异,但DBP组每窝活胎鼠个数的均数明显低于正常对照组,有明显统计学差异。DBP组子代胎鼠与正常对照组相比,AGD明显缩短,AGD/体重比例、生殖结节体积及生殖结节体积/体重比例明显减小(p<0.05)。DBP组雄性胎鼠尿道下裂发生率为43.64%,正常对照组未见尿道下裂。DBP组雄性胎鼠血清睾酮水平较正常对照组明显降低,具有明显统计学差异(p<0.05)。结论:孕期暴露DBP能诱导子代胎鼠尿道下裂的发生,能明显抑制雄性子代胎鼠血清睾酮的合成,对雄性子代胎鼠生殖结节的发育具有明显影响。第二部分DBP对雄性SD大鼠胚胎期生殖结节自噬及凋亡的影响及机制目的:研究孕期暴露DBP对雄性子代SD大鼠生殖结节细胞自噬和细胞凋亡的影响,进一步探讨孕期暴露DBP对雄性子代SD大鼠生殖结节细胞自噬相关通路的调控。方法:尿道下裂实验动物模型的建立同第一部分。孕第19天,取DBP组中的尿道下裂胎鼠及正常对照组中胎鼠的生殖结节,制作冰冻切片,用TUNEL染色法检测生殖结节细胞的凋亡情况;取子代雄性尿道下裂及正常对照组中胎鼠的生殖结节制作超薄切片,用透射电镜法观察生殖结节细胞中自噬结构的改变;取尿道下裂及正常对照组胎鼠的生殖结节,提取总蛋白,用免疫印迹法检测生殖结节组织中的自噬标记蛋白(LC3,P62)以及自噬通路关键蛋白(Akt,p-Akt,p-m TOR,p-S6,Beclin-1)。结果:与正常对照组比较,尿道下裂组生殖结节中TUNEL染色阳性细胞数明显增多;自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I的比例显著增高;p62蛋白表达明显减少,均具有明显统计学差异(p<0.05),而两组Beclin-1的表达无统计学差异。通过透射电镜在尿道下裂胎鼠生殖结节中发现大量自噬小体及自噬溶媒体,而正常对照组中相对少见。尿道下裂组p-Akt,p-m TOR,p-S6蛋白明显较正常对照组减少,而Akt的蛋白表达在两组中无明显差异(p<0.05)。结论:孕期DBP的暴露能够抑制子代雄性胎鼠生殖结节细胞凋亡,促进子代雄性生殖结节组织的细胞自噬。孕期暴露DBP对子代雄性胎鼠生殖结节细胞自噬的激活可能是通过抑制PI3K/Akt/m TOR通路的活性来实现。