二氯喹啉酸降解菌的分离及降解特性研究

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二氯喹啉酸(Quinclorac)属喹啉羧酸类除草剂。在田间残效期长,危害后茬作物。本文作者从农药厂长期受除草剂污染土壤中分离筛选到一株可以利用二氯喹啉酸为唯一碳,氮源生长的菌株。取代号为F1。首先,对F1菌株进行16S rDNA测序比对,序列分析显示F1菌株与Pseudomonas aeruginosa的16SrDNA序列具有100%相似性。结合F1菌株的主要生理生化特征,杆菌、革兰氏阴性、葡萄糖氧化产酸、氧化酶试验阳性、接触酶试验阳性、硝酸盐还原阳性、明胶液化阳性。淀粉水解、MR试验、VP试验和吲哚试验均为阴性。将F1鉴定为Pseudomonas sp.其次,研究了菌株F1对二氯喹啉酸的降解特性。结果表明: F1菌株以二氯喹啉酸为唯一碳源和氮源生长时,降解二氯喹啉酸的最适温度为35℃。pH值为6-8时,36h内对500mg/L二氯喹啉酸降解率达到90%左右。实验表明外加碳源葡萄糖并不能提高菌株F1降解二氯喹啉酸的能力。F1菌株在土壤二氯喹啉酸降解实验中也有显著的降解效果,并且施加菌剂的量越多降解效果越明显,但是当菌剂的施加量达到5×109个/kg时进一步提高施加量对降解二氯喹啉酸速率影响不显著。数据显示,随着时间的增加二氯喹啉酸的降解速率逐渐放慢,这可能是菌株的种群优势在自然环境中逐渐退化的原因。最后,通过SDS-PAGE检测了在二氯喹啉酸胁迫下,F1菌株的蛋白表达差异,通过检测杂环芳烃的主要降解酶类邻苯二酚双加氧酶酶活在不同培养条件下的变化情况,确定了邻苯二酚双加氧酶在降解二氯喹啉酸的过程中具有十分重要的作用。将不同培养条件下的F1菌株的RNA反转录为cDNA,进行该酶的RT-PCR扩增,扩增结果从RNA表达水平上证明了F1菌株的邻苯二酚双加氧酶由二氯喹啉酸诱导产生,并在二氯喹啉酸的降解过程中发挥着重要作用。
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