为鉴定并筛选出转双抗虫基因（Bt Cry1Ac基因和API基因）欧美杨107杨简称:（转基因107杨）对鳞翅目的美国白蛾和杨扇舟蛾具有较强抗性的株系,明确联合使用两种抗虫基因的抗虫效果。以10个转基因107杨株系为实验材料,未转基因的107杨为对照,进行了外源基因表达测定、抗虫性对比实验和转基因插入位点的对比。主要研究结果如下:1.对转基因107杨10个株系进行PCR扩增,证明Bt Cry1Ac基因和API基因已稳定插入植物基因组中。对Bt Cry1Ac基因检测,10个株系均能扩增得到一条与阳性质粒模板大小一致的546bp的特异性条带;对API基因检测,10个株系也均能扩增得到一条与阳性质粒模板大小一致的500bp的特异性条带,对照107杨基因组均未扩增出条带。2.用转基因107杨的10个株系和对照107杨分别提取总RNA,以m RNA为模板,利用逆转录酶反转录合成c DNA,对Bt Cry1Ac基因进行实时荧光定量PCR扩增。结果表明,10个株系中PB1、PB2、PB3、PB6、PB7、PB8、PB9和PB10在8月份均能检测到Bt Cry1Ac基因的荧光扩增信号,转录丰度最高为10~7-10~9,且上部＞中部＞下部,PB4、PB5和对照107杨均未检测到荧光信号。5、6、7、9月份检测的CK、PB1、PB4和PB8中,只有PB1和PB8能检测到荧光信号,但较8月份低10~2-10~4数量级,CK和PB4无荧光信号。3.采用ELISA检测10个转基因株系Bt Cry1Ac毒蛋白表达证明,10个株系中PB1、PB2、PB3、PB6、PB7、PB8、PB9和PB10在8月份均能检测到毒蛋白表达,蛋白含量在16.38-665.11ng/g,且上部＞中部＞下部,CK、PB4和PB5均未能检测到毒蛋白表达;5、6、7、9月份检测的CK、PB1、PB4和PB8中,只有PB1和PB8能检测到毒蛋白量,但毒蛋白含量仅为5.191-20.692ng/g,CK和PB4没有检测到毒蛋白表达。4.采用TAIL-PCR技术对转基因株系PB1、PB2和PB6进行外源基因插入位置检测,经过测序分析证明,3个转基因株系分别插入到107杨基因组的第14、6和3号染色体上,不属于同一个株系。5.以美国白蛾和杨扇舟蛾幼虫为靶标害虫,用转基因107杨10个株系田间生长1年生苗木叶片进行室内饲虫试验,结果表明,转基因株系对美国白蛾幼虫的杀虫效果高于杨扇舟蛾幼虫。筛选出8个株系（PB1、PB2、PB3、PB6、PB7、PB8、PB9和PB10）,对美国白蛾幼虫具有高抗虫性,2个株系（PB4和PB5）抗虫性低。用高抗株系对美国白蛾1-3龄幼虫进行饲喂,第2-3天死亡率达到80%以上,第四天达到100%。随着龄期的增大,幼虫的抗性也逐渐提高,饲喂美国白蛾6龄幼虫至第8-10天时,死亡率达到76.67%以上,到第14天死亡率全部为100%。筛选出5个株系（PB1、PB2、PB6、PB9和PB10）对杨扇舟蛾幼虫具高抗虫性,3个株系（PB3、PB7和PB8）抗虫性中等,两个株系（PB4和PB5）为低抗株系。高抗株系对1-4龄幼虫都有致死效应;中抗株系对1-2龄幼虫毒杀效果明显,对3龄以上幼虫毒杀效果不明显;低抗株系对幼虫没有毒杀效果,但对成虫发育具有一定的影响,使其少足、少触角等。