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实验目的:黄酮类化合物是一类天然物质,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等药理活性及低毒、多靶点等特点,而酰亚胺类化合物具有良好的抗肿瘤作用,故二者缀合可能产生更高效低毒的抗肿瘤化合物。本课题选用本实验室合成的新型酰亚胺修饰的黄酮类化合物WYX72,以肝癌细胞Hep G2、SMMC-7721为研究对象,对其抗肝癌作用及其分子机制进行探讨。实验方法:采用MTT法检测化合物WYX72对肝癌细胞（如Hep G2和SMMC-7721）,结肠癌细胞（如HT-29和HCT-116）和乳腺癌细胞（如MCF-7和MDA-MB-231）增殖作用的影响。通过PI染色、AO/EB/Hoechst 33342染色、Annexin V/PI染色、Rh123染色和DCFH-DA染色,探究细胞的死亡方式。采用细胞划痕实验,检测化合物WYX72对肿瘤细胞迁移的影响。采用Western Blot检测化合物WYX72作用Hep G2和SMMC-7721细胞后,Caspase家族、细胞色素C、Bcl-2家族以及细胞周期等相关蛋白的表达。通过小鼠H22实体瘤、H22肺转移、CT-26肺转移模型,探究化合物WYX72体内抗肿瘤增殖及转移的作用。实验结果:MTT实验结果显示,WYX72对Hep G2、SMMC-7721、HCT-116、HT-29、MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖有明显的抑制作用,作用48 h时对上述细胞的IC50分别为（7.80±2.76）μM、（1.54±0.45）μM、（8.22±0.21）μM、（4.32±0.68）μM、（4.85±0.99）μM、（2.91±1.04）μM。AO/EB/Hoechst 33342染色以及Annexin V/PI染色实验结果显示,WYX72能够诱导肝癌细胞Hep G2、SMMC-7721凋亡,并且呈现浓度-时间依赖性。Rh123染色结果显示,WYX72可以浓度及时间依赖性的诱导Hep G2、SMMC-7721细胞线粒体膜电位下降。PI染色结果显示WYX72诱导Hep G2、SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期,并呈浓度依赖性。DCFH-DA染色结果显示,WYX72浓度依赖性诱导HepG2、SMMC-7721细胞内活性氧的含量升高。细胞划痕实验结果显示,WYX72能够明显的抑制肿瘤细胞的迁移,并呈浓度及时间依赖性。Western Blot实验结果显示,WYX72可以激活线粒体途径和死亡受体途径,诱导Bax、p53、Cyclin-B1表达上调、Bcl-2、Cyclin-D1表达下调以及激活Caspase-8、Caspase-3、PARP-1并促进细胞色素C从线粒体释放到胞浆。小鼠H22实体瘤和肺转移模型结果显示,WYX72能够明显抑制肿瘤的生长和转移,抑瘤率为70.11%,抑制转移率为64.18%。此外,WYX72也能够明显抑制CT-26肺转移,抑制转移率为78.04%。实验结论:酰亚胺修饰的黄酮类化合物WYX72在体内、体外均有良好的抗肿瘤生长及转移作用,该作用与通过线粒体途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡有关。