脑红蛋白在星型胶质细胞缺血再灌注中的表达及其意义

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脑卒中是除肿瘤和心血管疾病外第三大致死性疾病,在我国每年新增病例约200万,其中80%以上的都是缺血性脑梗死,临床上除早期溶栓尚无有效、可靠的治疗手段。脑梗死后大多数患者留下不同程度的残障后遗症,不仅使病人生活质量下降,还给家庭和社会造成极大的经济负担。脑红蛋白(neuroglobin,NGB)是在血红蛋白和肌红蛋白之后发现的第三类具有运输及储存氧气的球蛋白,它广泛分布于脑组织的各个区域以及周围神经系统。星型胶质细胞是中枢神经系统中数量最多的细胞,它在维持大脑内环境的稳定,参与血脑屏障的形成和神经兴奋传递等方面有着重要作用。脑缺血性卒中时星型胶质细胞受到刺激形成活化的星型胶质细胞,后者参与形成胶质疤痕,胶质疤痕在缺血后期则严重阻碍了受损神经元的修复和再生,有文献报道在星型胶质细胞中存在NGB,经NGB反义处理后可引起缺血后星型胶质细胞凋亡增加。因此,研究NGB同缺血再灌注后星型胶质细胞的增殖之间的关系对于脑卒中的治疗具有重要意义。本文的主要目的是观察原代培养的SD大鼠星型胶质细胞在缺血及再灌注过程中星型胶质细胞的活化和增殖情况,以及NGB在这个过程中的表达情况,同时探讨NGB同C-RAF/MEK/ERK之间的关系。本文选用体外缺糖缺氧(OGD)及再灌注模型,选用原代培养的SD大鼠星型胶质细胞,通过免疫细胞荧光,EdU及PI/Hochest双染的方法检测OGD再灌注后星型胶质细胞的活化和增殖情况;运用免疫细胞荧光和real-time RT-PCR检测星型胶质细胞经过OGD再灌注处理,NGB在蛋白水平及mRNA水平的表达变化;在HEK-293T细胞中使用脂质体共转染C-RAF位点突变质粒及NGB质粒,研究NGB与RAF/MEK/ERK信号通路的关系。经研究可知星型胶质细胞在OGD及再灌注中活化和增殖,NGB在OGD及再灌注处理后的星型胶质细胞中表达量增加,提示NGB同缺血再灌过程中星型胶质细胞的增殖存在相关性。同时我们也发现在正常HEK-293T细胞NGB可以通过与C-RAF作用增强ERK1/2的激活,在OGD3hr时NGB可能通过其他激酶途径或者直接激活ERK1/2。
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