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地氟病作为目前我国流行最广泛,并且严重危害到人类健康与动物生命的一种的地方病和多发病,是由长时间摄入高浓度的氟引起的。大量研究表明,高氟可造成机体的广泛性损伤,包括免疫系统。本研究通过向小鼠饮水中添加不同剂量的氟(0mg/L,50mg/L,100mg/L)建立动物模型。采用透射电镜、流式细胞术、i TRAQ和Real-time PCR等技术,从血清学,组织病理形态学,细胞生物学和蛋白组学等角度研究了高氟的免疫毒性作用。具体结果如下:1.氟对小鼠血常规和胸腺超微结构的影响高氟可抑制小鼠的体增重,并造成胸腺超微结构的损伤,表现为核染色质减少、固缩,细胞膜核膜的双层膜结构不明显,细胞质浓缩出现空泡化,线粒体脊断裂、结构破坏等。血常规检查结果显示高氟可导致小鼠的外周血WBC数、淋巴细胞数、中间细胞数和粒细胞数目显著下降,改变淋巴细胞及粒细胞的比例,表明氟可以影响机体的免疫状态,这与胸腺损伤的结果相一致。2.氟对小鼠T细胞亚群的的影响采用流式细胞术检测小鼠胸腺T细胞亚群的变化,结果显示,高剂量的氟可导致胸腺CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例下降,且差异显著,而DP细胞在两个氟处理组内的比例上升,DN细胞在氟处理组中有下降趋势,证实了高氟可以影响胸腺T细胞的分化,抑制了CD4+或CD8+单阳性细胞的生成。3.氟对小鼠胸腺蛋白质与蛋白质相互作用的影响i TRAQ实验结果显示,高氟诱导350多个蛋白发生差异表达。进一步的生物信息学分析表明,这些蛋白主要分布于110多个信号通路,其中参与细胞代谢的有30多条,涉及70多个差异蛋白;参与信号调控通路的有50多,涉及160多个差异蛋白,参与疾病发生的有19条通路,涉及60多个蛋白。这些蛋白表达的紊乱可以影响胸腺细胞的生物过程,进而干扰T细胞的分化。4.氟对小鼠T细胞分化关键基因m RNA表达的影响实时荧光定量PCR技术验证差异蛋白m RNA表达影响的结果显示,高氟可抑制Rps3、Rps3a及Pfn1m RNA的表达,并促进Nefh和Nefm的m RNA表达,与蛋白表达检测结果相一致。综上所述,高氟可以造成胸腺超微结构的损伤,并影响胸腺T细胞分化发育,引起大量胸腺内蛋白的差异表达。本试验从蛋白组学的角度出发,研究了高氟对T淋巴细胞分化的影响,为进一步阐明氟干扰T细胞分化定向的机制奠定了基础。