天蓝色链霉菌cslA基因的研究

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纤维素合成酶及纤维素合成酶类似蛋白在生物中广泛存在,在细菌、真菌、植物及低等动物中发挥了重要作用;它们的合成产物β1-4葡聚糖是某些细菌生物膜(biofilm)主要成分之一,也是植物细胞壁的主要成分,同时纤维素合成酶及纤维素合成酶类似蛋白在细菌生物膜形成和植物组织器官发育过程中也有重要的作用。我们发现在链霉菌的基因组中也存在一个类似的编码基因,本研究对该基因在链霉菌的功能做了分析。该基因是链霉菌科斯文库质粒SCE20上的第10个ORF,经生物信息学的初步分析发现该基因的编码产物是一个糖基转移酶,与其它已知的纤维素合成酶的序列比较发现纤维素合成酶中保守的主要模体也存在于该糖基转移酶中。因此,我们把该基因命名为cslA基因。为了进一步研究该基因在链霉菌中的功能,我们对该基因进行了中断实验,实验观察结果表明该基因对链霉菌气生菌丝的发育具有重要的作用,中断菌株表现出产孢严重延迟。透射电子显微镜分析发现中断菌株的细胞壁和横膈有缺陷,孢子的形态也变得不规则;扫描电子显微镜观察发现中断菌株的气生菌丝有多分支的现象。荧光增白剂calcofluor染色实验结果表明,CslA蛋白在菌丝的顶端合成产物并且产物中含有β1-4糖苷键。绿色荧光蛋白的融合定位表明CslA蛋白在基质菌丝和气生菌丝中都能检测到表达而且蛋白主要是位于菌丝的生长顶端。细菌双杂交实验表明该蛋白与细菌骨架蛋白DivIVAsc有相互作用。胞外提取的Chaplins和Rodlins能够促进中断菌株产生气生菌丝,但是一系列的疏水蛋白报告系统检查结果表明疏水蛋白在中断菌株中都正常的表达。这些实验结果显示cslA基因是链霉菌形态分化和发育的一个重要基因,对它的研究有助我们理解细胞的发育过程。
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