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海带是一种重要的海产资源,富含生物活性大分子多糖,具有抗免疫调节,抗肿瘤,抗凝血和预防动脉粥样硬化的医学功效。近几年研究发现,硫酸化修饰可改良多糖的生物活性,而巨噬细胞泡沫化常出现在动脉粥样硬化发生的初期。本文主要开展了海带多糖(LJP61A)硫酸化修饰及修饰产物对oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化细胞形成的影响研究,现取得的研究结果如下: (1)通过水提醇沉法从海带中提取海带粗多糖,使用DEAE-Cellulose离子交换和Sephacryl S-500凝胶渗透两种色谱技术对海带粗多糖进行分离纯化,得到均一组分多糖LJP61A,分子量为1.96×106Da,并对LJP61A进行脱硫酸反应,获得DS-LJP。运用氯磺酸吡啶法(CSA-Pyr)对海带多糖均一组分进行硫酸化修饰,设置不同反应时间,得到了三种不同取代度的海带多糖硫酸化衍生物:SLJP-1,SLJP-2,SLJP-3,硫酸根取代度分别为:1.06、1.28和1.56。高效液相法测定其分子量分别为1.05×107Da、1.87×107Da和2.36×107Da。 (2)DS-LJP,SLJP-1,SLJP-2,SLJP-3对oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化形成的抑制作用及调控机制:研究海带多糖硫酸化衍生物干预oxLDL诱导RAW264.7细胞泡沫化模型发现,浓度为25ug/mL的多糖硫酸化衍生物SLJP-1,SLJP-2,SLJP-3可以明显减少细胞内的脂质聚集,其中SLJP-3效果最为明显。海带多糖经过硫酸化之后获得硫酸化衍生物SLJP-1,SLJP-2和SLJP-3,均有不同程度的抗oxLDL诱导的RAW264.7细胞泡沫化特性,尤以SLJP-3的抗巨噬细胞泡沫化效果最为显著。结合RT-PCR和Western bolt实验结果,可以推测,海带多糖硫酸化衍生物SLJP-3可能是通过下调细胞中的TC含量,下调促炎相关细胞因子TNF-α,IL-6,IL-1β以及上调抑炎因子IL-10的释放,干预MAPKs信号通路,对细胞炎性的发展起到一定的抑制作用,进而抑制oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化细胞的形成。