【摘 要】
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从海洋大型红藻多管藻中分离纯化到R-藻红蛋白(RPE).将多管藻在蒸馏水中自溶,然后离心,上清液用硫酸铵沉淀,5mM磷酸缓冲液透析,然后用DEAESepharose Fast Flow进行pH梯度洗脱
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从海洋大型红藻多管藻中分离纯化到R-藻红蛋白(RPE).将多管藻在蒸馏水中自溶,然后离心,上清液用硫酸铵沉淀,5mM磷酸缓冲液透析,然后用DEAESepharose Fast Flow进行pH梯度洗脱,收集R-藻红蛋白洗脱峰,测定其光谱特性.分离得到的R-藻红蛋白的吸收光谱中有三个吸收峰,分别为565nm、539nm和498nm,用498nm激发,荧光发射峰为574nm,最高吸收峰(565nm)与蛋白的特征吸收峰(280nm)的比值A<,565>/A<,280>达到了5.6,Native-PAGE表明,只有一条蛋白带,说明分离得到的R-藻红蛋白是纯化的.从钝顶螺旋藻中分离纯化出C-藻蓝蛋白(CPC)和异藻蓝蛋白(APC).将钝顶螺旋藻藻体浸入5mM的磷酸缓冲液,在-20℃冻融,15000g离心,硫酸铵沉淀,10mM磷酸缓冲液透析,然后用羟基磷灰石柱层析,20mM磷酸缓冲液(pH7.0,0.1M NaCl)洗脱,收集CPC,然后用100mM磷酸缓冲液(pH7.0,0.1M NaCl)洗脱,收集APC,然后,分别经P300柱层析,分离得到纯化的CPC和APC,光谱检测表明,CPC和APC的特征吸收峰分别为620nm和650nm,荧光发射峰分别位于650nm和665nm,A<,620>/A<,280>和A<,650>/A<,280>的比值分别达到4.03和3.91,Native-PAGE检测表明,没有其它杂蛋白.对三种藻胆蛋白在溶液中的分子与分子之间相互作用与聚集行为进行了研究.应用我们设计的简易方法制备了钝顶螺旋藻藻胆体(张玉忠等,海洋科学,1997,6,39-42),用戊二醛进行固定,滴加于喷碳的铜网上,在铜网上吸附1min,然后用磷钨酸染色,TEM观察,结果表明,钝顶螺旋藻藻胆体在电镜铜网上吸附时,具有自组装特性,自组装形成的聚集体形状相似,类似"雪花"状,具有明显的分形特性,符合DLA分形模型.为了进一步研究钝顶螺旋藻藻胆体在体外的聚集特性,将钝顶螺旋藻藻胆体滴加于空气/水界面上,应用LB膜技术制备藻胆体LB膜.钝顶螺旋藻在缺氮培养和恢复培养过程中,色素物质的变化主要经历了以下过程:在缺氮初始阶段,藻胆体会快速降解,使得藻胆蛋白含量迅速减少,之后叶绿素a的含量也随之迅速减少.两种主要色素物质的减少使得藻液的颜色由蓝绿色变为绿色并逐渐变为黄色.加入氮源恢复培养后,藻胆蛋白和叶绿素a的含量会同时增加,藻体颜色也由黄色逐渐恢复正常的蓝绿色.缺氮时间越长,藻液颜色恢复至正常的蓝绿色所需的时间也越长.
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