对噪声性听力损伤(noise induced hearing loss，NIHL)的研究，过去多 关注于耳蜗外毛细胞与其传出系统，而噪声暴露后耳蜗传入神经的损伤情 况及其损伤机制尚不甚明了。本实验拟通过观察噪声暴露后豚鼠耳蜗电位、 耳蜗形态以及耳蜗内毛细胞谷氨酸免疫反应的变化过程，以了解噪声暴露 对耳蜗传入神经末梢的损伤以及引起损伤的谷氨酸神经毒机制。实验分三 部分。 一、豚鼠耳蜗Corti氏器半薄切片法的建立 目前人们常常采用耳蜗石蜡包埋切片、明胶包埋冷冻切片及火棉胶包埋 切片方法来进行耳蜗形态学研究。然而，这些切片方法存在各自的不足：石 蜡包埋切片易细胞移位，明胶包埋冷冻切片易卷片，而火棉胶包埋切片法切 片厚、制作周期长。因而这些方法都难以满足我们的实验要求。为此，我们 建立了用 Epon812环氧树脂包埋的豚鼠耳蜗Corti氏器半薄切片法。这种切 片经常规染色，可清晰地显示耳蜗内、外毛细胞及支持细胞等结构；经免疫 组织化学染色，耳蜗Corti 氏器形态构像亦无破坏。而且本切片方法制作简 便、快捷。结论：豚鼠耳蜗Corti氏器半薄切片法不失为一种良好的切片法， 可为本实验提供理想的组织切片。 二、噪声暴露对豚鼠耳蜗内毛细胞下传入神经末梢的损伤 选用耳廓反射灵敏的健康白色红目豚鼠38只，随机分为正常对照组与 噪声暴露后8小时、1天、3天和7天组。实验中先作左耳慢性圆窗电极埋 植、右耳鼓膜破坏并外耳道堵塞，再将实验组暴露于120dB SPL的1/3倍频 程的4kHz窄带噪声中4小时，以造成左侧单耳噪声损伤的动物模型。测试 各组动物在噪声暴露前后的左耳耳蜗微音器电位(cochlear microphonics， CM）幅度与复合动作电位(compound action potential，CAP)阈值。于每组 军医进修学院硕士论文 噪声暴露对豚鼠耳蜗内毛细胞及其胞下传人神经末梢的彤响 摘耍 中任取两只动物，在透射电镜下观察双侧耳蜗C。ti器内外毛细胞及其下方 神经木梢的形态。结果：噪声暴露后各组豚鼠左耳CM非线性特性减弱、CAP 阈值升高（配对t检验，P＜0刀1）；外毛细胞胞浆和内毛细胞下方传入神经 末梢有空泡形成。随着噪声暴露后时间的延长，上述改变逐渐减轻，但当CM 非线性特性与外毛细胞形态几乎恢复时，CAP仍有显著阈移、耳蜗内毛细 胞下方传入神经末梢仍有空泡存在。结论：噪声暴露后除了外毛细胞，内毛 细胞下的传入神经末梢也受到损伤。 三、噪声暴留后豚鼠耳蜗内毛细胞谷氨酸免疫反应的变化 为探讨噪声暴露后耳蜗内毛细胞下传入神经末梢损伤是否与谷氨酸神经 毒有关，采用兔疫组化方法结合兔疫电镜技术，来观察上述实验动物在噪声 暴露后耳蜗内毛细胞谷氨酸免疫反应的变化过程，从而了解耳蜗内毛细胞神 经递质谷氨酸的释放情况。取全部动物的双侧耳蜗C。rti器第一圈，作半薄 切片，行谷氨酸免疫细胞化学染色；再于每组中取两只动物的双侧耳蜗相同 部位，作超薄切片，行谷氨酸免疫金标记。测定内、外毛细胞谷氨酸免疫阳 性反应（gl成axnate－like immunreactlvity，Gin－I以的平均光密度（average opticd density3 AOD）值与谷氨酸免疫金颗粒密度。结果：1与右侧相比较（配对 t 检验人左侧内毛细胞Q－h的AOD值在噪声暴露后8 ’J＼时降低中＜0刀5人 1天、3天和 7天无差异…功刀5）；而左侧外毛细胞Gin－e的 AOD值在噪 声暴露后不同时间均无变化中劝刀5人2．与正常对照组相比较，左侧耳蜗内 毛细胞谷氨酸免疫金颗粒密度在噪声暴露后8小时降低，1天、3天和7天 无差异；而右侧耳蜗内毛细胞及双侧耳蜗外毛细胞谷氨酸兔疫金颗粒密度在 噪声暴露后不同时间均无变化。结论：噪声暴露可引起耳蜗内毛细胞传入神 经递质谷氨酸的过度释放，继而引起耳蜗神经毒损伤。这可能是噪声暴露后 耳蜗传入神经末梢损伤的发生机制之一。