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目的:检测细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)过表达对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响。方法:1.构建CIAPIN1过表达重组慢病毒载体并建立其稳定转染H9c2心肌细胞株通过构建包装CIAPIN1过表达慢病毒载体,测定其滴度,将其转染H9c2细胞,检测转染效率。提取总蛋白,Western Blot检测CIAPIN1蛋白的表达,判定稳定转染细胞系是否构建成功。2.CIAPIN1过表达对H9c2心肌细胞H/R损伤的影响实验分组:CIAPIN1过表达阴性对照组(NC),CIAPIN1过表达阴性对照缺氧/复氧组(NC+H/R)和CIAPIN1过表达缺氧/复氧组(CIAPIN1+H/R)。NC+H/R组和CIAPIN1+H/R组细胞经历缺氧4 h/复氧2 h。应用MTT法检测H9c2细胞存活率,利用比色法来检测细胞的上清液内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;Hoechst 33258染色液从形态学角度观察细胞的凋亡情况;应用流式细胞术来检测H9c2细胞的凋亡率。结果:1.CIAPIN1过表达重组慢病毒载体的构建及其稳定转染H9c2细胞株的建立本实验成功构建了CIAPIN1过表达慢病毒载体,细胞的生长状态良好,荧光视野中可见大量的绿色荧光颗粒,CIAPIN1过表达慢病毒包装成功。转染H9c2心肌细胞之后,荧光表达效率超过95%。转染72 h后,与NC组相比,CIAPIN1组表达量明显升高(P<0.001)。2.CIAPIN1过表达对H9c2心肌细胞H/R损伤的影响经过缺氧4 h复氧2 h的处理之后,与NC组相比,NC+H/R和CIAPIN1+H/R组细胞的存活率明显下降(P<0.001);与NC+H/R组相比,CIAPIN1+H/R组细胞的存活率显著升高(P<0.001)。与NC组相比,NC+H/R组和CIAPIN1+H/R组LDH活性均明显升高(P<0.01)。但与NC+H/R组对比,CIAPIN1+H/R组LDH的漏出显著减少(P<0.001)。用Hoechst 33258染色后观察到NC+H/R组可见细胞核固缩,浓染的情况明显增多,呈细小不规则的颗粒状,细胞碎片较多,而CIAPIN1+H/R组仅有部分细胞核呈现固缩凝聚,可见致密浓染,细胞碎片较少。流式细胞术测定结果显示NC+H/R组的早期凋亡率与NC组相比,显著升高(P<0.01);而CIAPIN1+H/R组早期凋亡率明显低于NC+H/R组(P<0.05)。结论:1.CIAPIN1过表达慢病毒转染H9c2心肌细胞,可形成稳定转染的细胞系。2.本实验初次成功表明过表达CIAPIN1可减轻由H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤。