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目的研究异质性万古霉素中介金葡菌(hVISA)的耐药机制,寻找与异质性耐药相关的重要蛋白和基因,并筛选出代表hVISA的生物标记物。内容hVISA与VSSA蛋白质组之间的分析比较,寻找差异蛋白；实时荧光定量PCR方法验证差异蛋白的普遍性。方法选取2008年从北京协和医院(PUMCH)同一病人体内分离的VSSA(25)和hVISA(23).微量肉汤稀释法测定二者的体外敏感性；提取二者的全蛋白,通过双向电泳对蛋白进行分离,利用MALDI-TOF/TOF二级质谱仪对差异蛋白进行鉴定。筛选与万古霉素异质性耐药相关的重要蛋白,通过实时荧光定量PCR的方法,在26对hVISA/VSSA中进行转录水平的普遍性验证；同时,对与万古霉素异质性耐药高度相关的RNAⅢ和膜蛋白编码基因pbpB和pbpD进行转录水平的验证。结果体外药敏显示,hVISA(23)与VSSA(25)菌株都具有多重耐药表型,对β-内酰胺类及加酶抑制剂和氨基糖苷类均表现为耐药；但与VSSA相比,hVISA还对克林霉素和红霉素耐药,且对甲氧苄啶、替考拉宁、万古霉素和奎奴普汀-达福普汀的MIC值比VSSA高2-8倍。利用双向电泳+MALDI-TOF/TOF质谱这一经典组合,本研究共发现了7个与万古霉素异质性耐药可能相关的蛋白质,分别为Asp23、FabZ、GpmA、IsaA、AhpC、MenB和MsrA2。其中,在进行转录水平分析的5个(Asp23、AhpC、MsrA2、MenB、GpmA)蛋白中,有3个(Asp23、MenB、GpmA)蛋白在两个水平表达一致,即在hVISA(23)中高表达(>1.50倍)；1个蛋白(MsrA2)在两个水平表达相反,另外1个(AhpC)蛋白在转录水平表达差异无统计学意义。在普遍性验证中,只有GpmA蛋白的编码基因在26对hVISA/VSSA中得到了验证。此外,RNAⅢ在hVISA(23)中高表达,但在普遍性验证中,表现为在hVISA中低表达；pbpB和pbpD均在hVISA(23)中高表达,并在其他25对hVISA/VSSA中得到了验证。结论Asp23、FabZ、GpmA、IsaA.AhpC、MenB和MsrA27个差异蛋白在介导万古霉素异质性耐药中可能发挥重要作用RNAⅢ、pbpB和pbpD三个基因的表达情况与万古霉素异质性耐药很相关；GpmA蛋白有望成为快速检测hVISA的生物标记物。