转il-2胡萝卜及其杂交后代的分子生物学检测与遗传研究

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:snailswuya
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本研究以通过根癌农杆菌介导法转化得到的il-2基因胡萝卜(Daucus carota L.)为试验材料,其品种为日本黑田五寸参,通过PCR扩增、ELISA和Western杂交等技术,对T2、T3代转il-2基因胡萝卜进行分子生物学检测。同时对il-2基因在T2、T3代自交及其不同株系间杂交F1中的遗传规律进行了探讨与分析。  本研究中,共播种转il-2基因T2代胡萝卜种子750粒,实际出苗172株。对T2代胡萝卜的2个转基因系成活下来的65个植株进行PCR检测,8个样品扩增出目的条带且每个转基因系都有il-2PCR阳性植株,阳性率为12.3%;T3代自交系播种478粒,成活212株。将其进行PCR扩增检测il-2阳性株42株,阳性率为19.8%;T3代杂交系播种180粒,待检测41株,鉴定出阳性株13株,阳性率为31.7%。以上检测发现均不符合转基因植株:非转基因植株=3:1的孟德尔分离规律。  对 T2、T3代包括杂交株在内的12个转基因系的32个 PCR阳性植株进行ELISA检测,结果显示,IL-2表达量约为1371~2561.8ng/g FW,占总可溶性蛋白的0.01%~0.09%,转基因事件影响目的蛋白的表达水平。从PCR检测为阳性的植株中随机抽取6个样品进行Western杂交,结果显示被检样品均出现杂交条带,进一步证实il-2在转基因胡萝卜后代中能正常表达,并随世代进行遗传传递。
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