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研究目的:本课题拟通过链尿佐菌素(streptozotocin STZ)诱导糖尿病肾病(diabefic nephropathy DN)大鼠模型,用二氢杨梅素(dihydromyricetin DMY)进行干预性实验,观察其对STZ模型鼠肾脏的保护作用并探讨其可能的机制,为将二氢杨梅素开发成防治DN的药物提供科学实验依据。
研究方法
选择健康雄性Wistar大鼠57只(体重200~250g),常规饲养1周后,禁食12小时后随机抽取49只腹腔注射STZ(55mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,72小时后尾静脉采血测定血糖,≥16.7mmol/L确定为糖尿病大鼠模型,其余16只为正常对照组注射同等体积的柠檬酸缓冲液后随机分为7组,分别为:正常对照组(CON)8只、糖尿病对照组(DM)8只、氨基胍(aminoguanidine AG,1g氨基胍溶解于1L饮水中)治疗组9只、DMY腹腔注射组(IP,30mg/kg)8只、DMY灌胃治疗糖尿病大鼠分高、中、低三个剂量组,分别为高剂量治疗组(H,90mg/kg)8只、DMY中剂量治疗组(M,30mg/kg)8只、DMY低剂量治疗组(L,10mg/kg)8只。各治疗组按以上剂量每同上午灌胃给药,正常对照组和糖尿病对照组以等量的双蒸水灌胃。给药12W后处死大鼠,取血、尿和肾脏标本,测定血糖(BG)、血尿素氮(BUN)、血尿肌酐(Scr,Ucr)、肌酐清除率(Ccr)、24h尿白蛋白排泄率(UAER)、肾指数(RI)、肾组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性、肾皮质AGEs含量及通过免疫组织化学的方法测定。肾组织CTGF的表达;光学显微镜下观察各组肾脏组织病理学改变。研究结果12W后,DM组大鼠的BG、24hUV、BUN、Cr、Ccr、UAER及RI较CON组明显升高(p<0.01),体重(BW)明显降低(p<0.01);肾脏SOD的活性与CON组相比明显降低(p<0.01);肾皮质AGEs较CON组明显升高,差异有显著性(p<0.01);光学显微镜下糖尿病大鼠肾切片可观察到肾小球面积增大,肾小球内系膜细胞明显增多,系膜区明显扩大,滤过间隙显著增宽,肾小管上皮细胞可见空泡变性。CTGF免疫组织化学结果显示DM大鼠肾组织在肾小球、肾小管上皮细胞及系膜细胞胞浆处的着色较正常对照组明显浓集,图像分析后得到的CTGF积分光密度也明显升高(p<0.01)。
各DMY治疗组大鼠的BG、BW、BUN与DM组相比无明显差异(p>0.05)。IP组与H治疗组均能显著减少糖尿病大鼠24 hUV(p<0.01)和UAER(p<0.01),而M组和L组与DM组相比则无显著性差异(p>0.05)。各药物治疗组中IP组能显著降低Scr的水平(p<0.01),其余组与DM组相比无显著性差异(p>0.05)。M组和L组大鼠的RI和Ccr与DM组相比未达显著性差异(p>0.05),其余均有明显改善作用(p<0.05)。IP、H组与M治疗组较DM组比较,肾脏SOD的活性与DM组相比均明显升高(前两者p<0.01,后者p<0.05)。IP和H组大鼠肾皮质AGEs水平明显降低,差异有显著性(后者p<0.01),而M组和L组与DM组比较则无显著性差异(p>0.05)。上述DMY治疗组的作用均未发现优于阳性药物AG治疗组。光镜下IP组与H治疗组大鼠肾组织系膜细胞的增多、系膜区的扩大、滤过间隙的增宽及肾小管上皮细胞空泡变性等病理改变较DM组有所减轻。经测定各组大鼠肾脏CTGF积分光密度值,各药物治疗组中IP组与H组较DM组相比,着色有所减轻,积分光密度明显减低,差异有显著性。
研究结论:糖尿病大鼠12W时肾脏出现明显的结构和功能改变,二氢杨梅素可以明显改善肾脏结构和功能损伤的进展,对肾脏损伤具有保护作用,其作用机制可能与二氢杨梅素抗氧化和抑制非酶糖基化作用及抑制CTGF的过度表达有关。二氢杨梅素对肾脏的保护作用随着剂量的增加作用也随之增强,腹腔注射组(30mg/kg)和高剂量组(90mg/kg)治疗效果显著。