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目的:本研究以中医气血理论为支撑,将糖尿病心肌病“气虚血瘀”病机与现代分子生物学相结合,应用高糖诱导大鼠心肌成纤维细胞构建糖尿病心肌病细胞模型,通过观察TGF-β1/Smads信号通路相关因子的表达,研究该通路与糖尿病心肌纤维化的相关性,及益气活血法对糖尿病心肌病的作用机制,以期为中医药防治该病提供理论依据。材料与方法:复苏及传代培养大鼠心肌成纤维细胞,随机分为6组:对照组、模型组、缬沙坦组及益气活血方低、中、高剂量组。对照组用5mmol/L葡萄糖进行处理,其余各组均用25mmol/L葡萄糖进行处理,先采用MTT法检测对照组和模型组在葡萄糖处理后6h、12h、24h、48h和72h时细胞的增殖与活力,用吸光度（OD值）表示。在此基础上,选择最佳作用时间,将益气活血方各组及缬沙坦组用相应浓度药物进行处理,再用MTT法检测这6组细胞的增殖与活力;用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-β1蛋白表达水平;用蛋白质印迹法（Western blot）检测phospho-Smad2、phospho-Smad3和Smad7的蛋白表达水平。结果:1.MTT法检测结果:⑴时间浓度梯度检测:对照组OD值随时间的延长逐渐升高,至48h达到峰值,于72h开始下降;随着时间的延长,模型组OD值亦逐渐升高,至24h达峰值,于48h开始逐渐下降。与对照组相比,模型组在6、12、24h时的OD值均明显升高（P<0.01）。⑵益气活血方作用效果:与对照组比较,模型组的OD值明显升高（P<0.01）;与模型组比较,益气活血方低、中、高剂量组和缬沙坦组的OD值均明显降低（P<0.01）,且高剂量组降低最为明显;与缬沙坦组比较,益气活血方高剂量组的OD值显著降低（P<0.01）,而低、中剂量组均明显升高（P<0.01或P<0.05）。综上,各治疗组疗效依次为:益气活血方高剂量组>缬沙坦组>益气活血方中剂量组>益气活血方低剂量组。2.ELISA检测结果:⑴与对照组比较,模型组的Ⅰ型胶原蛋白的表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组Ⅰ型胶原蛋白的表达水平均明显下降（P<0.01）;与缬沙坦组比较,益气活血方高剂量组的Ⅰ型胶原蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）,而低剂量组明显升高（P<0.05）,中剂量组无明显差异（P>0.05）。综上,各治疗组疗效依次为:益气活血方高剂量组>缬沙坦组>益气活血方中剂量组>益气活血方低剂量组。⑵与对照组比较,模型组的Ⅲ型胶原蛋白的表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组Ⅲ型胶原蛋白的表达水平均明显下降（P<0.01）;与缬沙坦组比较,益气活血方高剂量组的Ⅲ型胶原蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）,而低、中剂量组均明显升高（P<0.05）。综上,各治疗组疗效依次为:益气活血方高剂量组>缬沙坦组>益气活血方中剂量组>益气活血方低剂量组。⑶与对照组比较,模型组TGF-β1的表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组TGF-β1的表达水平明显下降（P<0.01）;与缬沙坦组比较,益气活血方高剂量组TGF-β1的表达水平显著降低（P<0.01）,而低、中剂量组均明显升高（P<0.01）。综上,各治疗组疗效依次为:益气活血方高剂量组>缬沙坦组>益气活血方中剂量组>益气活血方低剂量组。3.Western blot检测结果:⑴与对照组比较,模型组的phospho-Smad2、phospho-Smad3蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）,与模型组比较,各治疗组phospho-Smad2和phospho-Smad3的蛋白表达水平均明显下降（P<0.01）,与缬沙坦组比较,益气活血方高剂量组phospho-Smad2和phospho-Smad3的蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,低、中剂量组均明显升高（P<0.05或P<0.01）。综上,各治疗组疗效依次为:益气活血方高剂量组>缬沙坦组>益气活血方中剂量组>益气活血方低剂量组。⑵与对照组比较,模型组Smad7的蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组Smad7的蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）;益气活血方中、高剂量组Smad7蛋白表达水平较缬沙坦组均明显升高（P<0.05或P<0.01）,而低剂量组与缬沙坦组比较无显著差异（P>0.05）。综上,各治疗组疗效依次为:益气活血方高剂量组>益气活血方中剂量组>益气活血方低剂量组>缬沙坦组。结论:1.“气虚血瘀”为糖尿病心肌病的根本病机之一,依照益气活血法拟定的益气活血方能显著抑制高糖条件下心肌成纤维细胞的增殖与活力,并抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达,从而改善细胞外基质的过度沉积,以改善心肌纤维化,起到保护心肌的作用。2.益气活血方抗心肌纤维化的作用机制可能是下调TGF-β1的表达,抑制Smad2、Smad3的磷酸化,并上调Smad7的表达,且呈剂量相关。即通过调控TGF-β1/Smads信号通路相关因子的表达,以减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌,从而改善糖尿病心肌纤维化,进而对糖尿病心肌病起到有效的防治作用。