PCR引发的mtDNAD环重复区假异质性及其机制的研究

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ahchzgq
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本文采用了PCR方法,研究了蓝狐(Alopexlagopus)、黑熊(Selenarctosthibetanus)、棕熊(Ursusarctos)、狗(Canisfamiliaris)、狼(Canislupus)、虎(Panheratigris)的相应区域。结果显示,在蓝狐、黑熊、棕熊、狗和狼,无论以总DNA为模板,还是以PAGE电泳纯化的扩增产物或克隆质粒为模板,扩增产物在8%PAGE胶上都表现为梯状谱带,相邻条带之间相差1个重复单位。说明这种梯状谱带是一种PCR引发的假异质性。进一步研究显示,这种假异质性与引物无关,在一定程度上受DNA聚合酶种类的影响,但不能被消除。虎在上述实验中均不出现梯状谱带。通过RNAstructurev3.7软件对上述物种重复区序列的结构进行分析发现,不同的重复序列可以产生不同的周期性二级结构,当新链延伸到达这样的结构时,DNA聚合酶就有可能与该高级结构的双链位置结合,而新生链起到引物作用,使聚合酶有机会将链的延伸越过一个或几个重复单位,或者转移到与原模板链相同或同源的链上。据此提出了PCR过程中产生假异质性的可能机制,并认为用PCR方法来研究D环重复序列的异质性具有极大的风险性。
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